Question

【題目】自然界中有很多種微生物，尚未能分離純化培養(yǎng)，科研人員開發(fā)了新的微生物分離 技術(shù)以篩選微生物。

（1）配制培養(yǎng)基并分離微生物的步驟是：計算→稱量→溶化→調(diào)pH→______________→倒平板→______________→培養(yǎng)。篩選微生物的一般思路是，根據(jù)表型特征利用____培養(yǎng)基進行篩選。

（2）若某種微生物沒有明顯表型特征時，就無法通過上述方法篩選，科研人員通過圖所示的流程進行篩選。

①據(jù)圖分析，科研人員利用目標(biāo)微生物編碼膜蛋白的____________________，構(gòu)建表達載體，并導(dǎo)入用________________處理的大腸桿菌細胞中，獲取大量膜蛋白。

②用獲取的膜蛋白作為抗原，利用兔子制備單克隆抗體的具體流程是：_____。

（3）將上述帶有熒光的單克隆抗體與待分離微生物群體混合，目的是_____目標(biāo)微生物。 用流式細胞儀分離不同熒光強度的細胞，結(jié)果如圖2所示。對結(jié)果進行比較，應(yīng)從區(qū)域_____（選填圖中數(shù)字）的細胞中篩選目標(biāo)微生物。

Answer 1

【答案】（高壓蒸汽）滅菌 接種 選擇 基因序列 CaCl2 用膜蛋白作為抗原多次免疫兔子，取脾臟中的B淋巴細胞（或漿細胞）與骨髓瘤細胞融合，篩選得到單個分泌抗膜蛋白抗體的雜交瘤細胞，進行克隆培養(yǎng) 標(biāo)記 ②

【解析】

單克隆抗體的制備過程：首先用特定抗原注射小鼠體內(nèi)，使其發(fā)生免疫，小鼠體內(nèi)產(chǎn)生具有免疫能力的B淋巴細胞。利用動物細胞融合技術(shù)將B淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合，單克隆抗體制備過程中的兩次篩選：第一次篩選：利用特定選擇培養(yǎng)基篩選，獲得雜交瘤細胞，即AB型細胞（A為B淋巴細胞，B為骨髓瘤細胞），不需要A、B、AA、BB型細胞。第二次篩選：利用多孔板法和抗原-抗體雜交法篩選，獲得產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞。最終篩選獲得的雜交瘤細胞的特點是能無限增殖并能分泌特異性抗體，最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中提取單克隆抗體。

（1）制備固體平板培養(yǎng)基的主要操作步驟是：計算→稱量→溶化→調(diào)pH→滅菌→倒平板→接種→培養(yǎng)。選擇培養(yǎng)基可以抑制其它微生物生長，而有利于目的菌的生長，所以篩選微生物一般使用選擇培養(yǎng)基。

（2）①據(jù)圖分析，科研人員利用基因工程將目標(biāo)微生物編碼膜蛋白的基因序列，構(gòu)建基因表達載體，并導(dǎo)入用CaCl2處理的大腸桿菌細胞中，使目的基因增殖并表達可獲取大量膜蛋白。

②用獲取的膜蛋白作為抗原，利用兔子制備單克隆抗體的具體流程是：用膜蛋白作為抗原多次免疫兔子，使其體內(nèi)產(chǎn)生針對該膜蛋白的免疫細胞，取脾臟中已經(jīng)免疫的B淋巴細胞（或漿細胞）與骨髓瘤細胞融合，通過選擇培養(yǎng)基的篩選和抗體檢測可篩選得到單個分泌抗膜蛋白抗體的雜交瘤細胞，并進行體內(nèi)或體外的克隆培養(yǎng)。

（3）利用抗體和抗原特異性結(jié)合的特性，可將上述帶有熒光的單克隆抗體與待分離微生物群體混合，目的是標(biāo)記目標(biāo)微生物。加入抗體后熒光性強的場所說明含有目標(biāo)微生物多，所以據(jù)圖可知應(yīng)從區(qū)域②的細胞中篩選目標(biāo)微生物。