Question

9．閱讀下列資料：
資料甲：某種細菌體內(nèi)有抗蟲基因，該基因能指導(dǎo)抗蟲毒蛋白的合成．我國科學(xué)家成功地將該抗蟲基因?qū)�入棉花細胞中，培育出了抗蟲效果好的棉花新品種．
資料乙：研究表明，抗H蛋白單克隆抗體能抑制過量表達H蛋白的乳腺癌細胞的生長，科學(xué)家利用小鼠制備出了抗H蛋白的單克隆抗體．
請回答下列問題：
（1）資料甲中，獲取抗蟲基因時可使用EcoRI，其原因是含抗蟲基因的DNA片段中含有EcoRI能夠識別的特定的核苷酸序列．向棉花細胞導(dǎo)入抗蟲基因時，我國科學(xué)家采用了花粉管通道法．抗蟲基因?qū)�入棉花細胞后，為確定棉花植株是否具有抗蟲特性以及抗性的程度如何，需要做抗蟲的接種實驗進行個體水平的鑒定．
（2）資料乙中，選擇H蛋白作為單克隆抗體的作用靶點，是因為H蛋白在成年個體的正常組織細胞中低表達（填“低表達”或“高表達”）．將H蛋白注射到小鼠體內(nèi)，從該小鼠的脾臟中獲得相應(yīng)的B淋巴細胞，將其與骨髓瘤細胞進行融合，細胞融合利用的原理是細胞膜具有流動性．與植物原生質(zhì)體融合過程相比，該融合過程特有的誘導(dǎo)方法是用滅活的病毒處理．在雜交瘤細胞的體外培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)液中是否需要添加血清需要（填“需要”或“不需要”）；培養(yǎng)箱中充入5% CO₂的主要作用是維持培養(yǎng)液（適宜）的pH．為避免培養(yǎng)過程中代謝產(chǎn)物對雜交瘤細胞的毒害，常采取的措施是定期更換培養(yǎng)液（基）．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）獲取抗蟲基因時需使用限制酶切割，如獲取抗蟲基因可用EcoRI切割，其原因是含抗蟲基因的DNA片段中中含有EcoRI能夠識別的特定的核苷酸序列．由于棉花為被子植物，故向棉花細胞導(dǎo)入抗蟲基因時，我國科學(xué)家采用了花粉管通道法．抗蟲基因?qū)�入棉花細胞后，為確定棉花植株是否具有抗蟲特性以及抗性的程度如何，需要做抗蟲的接種實驗進行個體水平的鑒定．
（2）據(jù)題意可知H蛋白在成年個體的正常組織細胞中低表達，在癌細胞中過量表達．細胞融合利用的原理是利用了細胞膜具有流動性．與植物原生質(zhì)體融合過程相比，動物細胞融合過程特有的誘導(dǎo)方法是 用滅活的病毒處理．在雜交瘤細胞的體外培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)液中需要添加血清；培養(yǎng)箱中充入5%CO₂，其目的是為了維持培養(yǎng)液（適宜）的pH．培養(yǎng)過程中要定期更換培養(yǎng)液，以免培養(yǎng)過程中代謝產(chǎn)物對雜交瘤細胞的毒害．
故答案為：
（1）EcoRI能夠識別的特定的核苷酸序列   花粉管通道    抗蟲的接種          
（2）低表達   細胞膜具有流動性   用滅活的病毒處理    需要    維持培養(yǎng)液（適宜）的pH    定期更換培養(yǎng)液（基）

點評 本題考查了基因工程及動物細胞融合在生產(chǎn)實踐中的應(yīng)用，要求考生識記基因工程的原理、操作工具及操作步驟等，掌握各步驟中的相關(guān)細節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識準確解答．