Question

如圖為轉基因煙草培育過程流程圖，請回答：
（l）攜帶外源基因的質粒除了含有外源基因外，還包括

 

、

 

、復制原點和標記基因中標記基因的作用是

 

，構建攜帶外源基因的質粒時，需要使用的工具酶是

 

．
（2）圖中目的基因導人煙草細胞的方法是

 

，感染過程是利用農桿菌中Ti質粒上的

 

，使外源基因進入并整合到煙草染色體DNA上．此外另一十分簡便經濟的導人方法是

 

．
（3）將含有目的基因的受體細胞培養(yǎng)成煙草植株的技術叫做

 

，其理論基礎是

 

，圖中的生根、長芽過程屬于

 

過程．
（4）在培養(yǎng)過程中，除添加必要的營養(yǎng)物質，還需要向培養(yǎng)基中添加

 

，同時除提供適宜的溫度、光照和氧氣等環(huán)境條件外，成功的另一關鍵是

 

．

Answer 1

考點：基因工程的原理及技術,植物組織培養(yǎng)的概念及原理

專題：

分析：基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答： 解：（l）基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等，其中標記基因的作用是鑒別受體細胞中國是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細胞篩選出來；構建基因表達載體時，首先需用限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和運載體，其次還需用DNA連接酶將目的基因和運載體連接形成重組DNA分子．
（2）由圖可知，將目的基因導入受體細胞的方法是農桿菌轉化法，其原理是：農桿菌中的Ti質粒上的T-DNA可轉移至受體細胞，并且整合到受體細胞染色體的DNA上．根據農桿菌的這一特點，如果將目的基因插入到Ti質粒的T-DNA上，通過農桿菌的轉化作用，就可以把目的基因整合到植物細胞中染色體的DNA上．將目的基因導入植物細胞的另一十分簡便經濟的導人方法是花粉管通道法．
（3）將轉基因細胞培養(yǎng)成轉基因植株還需采用植物組織培養(yǎng)技術，其理論基礎是植物細胞具有全能性．植物組織培養(yǎng)包括脫分化和再分化兩個重要的步驟，圖中的生根、長芽過程屬于再分化過程．
（4）決定脫分化和再分化的關鍵因素是植物激素的種類及比例，因此在培養(yǎng)過程中，除添加必要的營養(yǎng)物質，還需要向培養(yǎng)基中添加植物激素；植物組織培養(yǎng)時除提供適宜的溫度、光照和氧氣等環(huán)境條件外，成功的另一關鍵是無菌操作．
故答案為：
（1）啟動子     終止子    鑒別受體細胞中國是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細胞篩選出來     限制酶和DNA連接酶
（2）農桿菌轉化法     T-DNA    花粉管通道法
（3）植物組織培養(yǎng)      植物細胞具有全能性     再分化
（4）植物激素     無菌操作

點評：本題結合轉基因煙草的培育過程圖解，考查基因工程和細胞工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，掌握各步驟中的相關細節(jié)；識記植物組織培養(yǎng)的過程、條件及原理等基礎知識，能結合所學的知識準確答題．