Question

目前所用的質(zhì)粒載體主要是以天然細(xì)菌質(zhì)粒的各種元件為基礎(chǔ)重新組建的人工質(zhì)粒，pBR322質(zhì)粒是較早構(gòu)建的質(zhì)粒載體，其主要結(jié)構(gòu)如圖所示。

 

(1)構(gòu)建人工質(zhì)粒時(shí)要有抗性基因，以便于                               。

(2)pBR322分子中有單個(gè)EcoR I限制酶作用位點(diǎn)，EcoR 1只能識別序列一GAATTC一，并只能在G與A之間切割。若在某目的基因的兩側(cè)各有1個(gè)EcoR I的切點(diǎn)，請畫出目的基因兩側(cè)被限制酶EcoR I切割后所形成的黏性末端。

                                                                      

(3)pBR322分子中另有單個(gè)的BamHI限制酶作用位點(diǎn)，現(xiàn)將經(jīng)BamHI處理后的質(zhì)粒與用另一種限制酶BgIⅡ處理得到的目的基因，通過DNA連接酶作用恢復(fù)___     ___ 鍵，成功的獲得了重組質(zhì)粒。

 (4)為了檢測上述重組質(zhì)粒是否導(dǎo)入原本無ampR和tetR的大腸桿菌，將大腸桿菌在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖二的菌落。再將滅菌絨布按到培養(yǎng)基上，使絨布面沾上菌落，然后將絨布按到含四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖三的結(jié)果(空圈表示與圖二對照無菌落的位置)。與圖三空圈相對應(yīng)的圖二中的菌落表現(xiàn)型是___       _____ ，圖三結(jié)果顯示，多數(shù)大腸桿菌導(dǎo)入的是___            __。

 

Answer 1

【答案】

(1)篩選(鑒別目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞)

  (2)

  (3)磷酸二酯鍵  

 (4)能抗氨芐青霉素，但不能抗四環(huán)素        pBR322質(zhì)粒

【解析】（1）抗性基因?qū)儆跇?biāo)記基因，用于鑒別目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞。

（2）該限制酶EcoR I的識別序列是GAATTC，并在G與A之間切割。

（3）DNA連接酶連接的是磷酸二酯鍵。

（4）與圖二對照的空圈表示能抗氨芐青霉素，但不能抗四環(huán)素的細(xì)菌，圖三結(jié)果顯示，多數(shù)細(xì)菌導(dǎo)入了普通質(zhì)粒。