Question

17．表中列出了幾種限制酶識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)，圖l、圖2中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)．請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

限制酶序號(hào)	①	②	③	④	⑤	⑥
限制酶	AluⅠ	BamHⅠ	PstⅠ	EcoRⅠ	BglⅡ	HindⅢ
識(shí)別序列及切割位點(diǎn)

（1）分析表中6種限制酶識(shí)別的序列特點(diǎn)，其不同點(diǎn)是：不同酶識(shí)別的序列不同，共同點(diǎn)是：每一序列的雙鏈反向閱讀堿基序列相同（回文序列）．
（2）限制酶②和⑤的切割后產(chǎn)生的黏性末端是一樣的．（填限制酶的序號(hào)）
（3）在用圖中的質(zhì)粒和外源DNA構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，不能使用EcoR I切割的原因是EcoRI會(huì)破壞質(zhì)粒中的四環(huán)素抗性基因結(jié)構(gòu)．
（4）如果用限制酶HindⅢ與BamHI和DNA連接酶將圖中的質(zhì)粒和外源DNA構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，則此過(guò)程可獲得2種環(huán)狀DNA．（只考慮質(zhì)粒和目的基因之間的連接）
（5）圖2中的外源DNA用限制酶②和⑥同時(shí)切割，能產(chǎn)生3種DNA片段．
（6）目的基因插入質(zhì)粒后，不能影響質(zhì)粒的復(fù)制．
（7）如果要初步篩選出導(dǎo)入上述重組質(zhì)粒的某種細(xì)菌，則應(yīng)該在培養(yǎng)基中加入適量四環(huán)素．

Answer 1

分析 分析圖1：外源DNA上含有AluⅠ、BamHⅠ、BglⅡ、EcoR I和HindⅢ五種限制酶的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)，其中AluⅠ的切割序列位于目的基因上．
分析圖2：質(zhì)粒上BamHⅠ、BamHⅠ、EcoR I和HindⅢ四種限制酶的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)，其中EcoRⅠ的切割位點(diǎn)位于四環(huán)素抗性基因上．

解答 解：（1）分析表中6種限制酶識(shí)別的序列特點(diǎn)，其不同點(diǎn)是：不同酶識(shí)別的序列不同，共同點(diǎn)是：每一序列的雙鏈反向閱讀堿基序列相同（回文序列）．
（2）表中限制酶②和⑤的切割后產(chǎn)生的黏性末端是一樣的，都是CTAG-．
（3）質(zhì)粒中，EcoRⅠ的切割位點(diǎn)位于四環(huán)素抗性基因上，若用該限制酶切割會(huì)破壞該標(biāo)記基因，因此在用圖中的質(zhì)粒和外源DNA構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，不能使用EcoR I切割．
（4）如果用限制酶HindⅢ與BamHI和DNA連接酶將圖中的質(zhì)粒和外源DNA構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，若只考慮質(zhì)粒和目的基因之間的連接，則此過(guò)程可獲得2種環(huán)狀DNA，一種是含有抗性基因的環(huán)狀DNA，另一種是不含抗性基因的環(huán)狀DNA．
（5）圖2中的外源DNA含有一個(gè)限制酶②的切割位點(diǎn)，也含有一個(gè)限制酶⑥的切割位點(diǎn)，因此用限制酶②和⑥同時(shí)切割，能產(chǎn)生3種DNA片段．
（6）目的基因插入質(zhì)粒后，不能影響質(zhì)粒的復(fù)制．
（7）由圖可知抗性基因是四環(huán)素標(biāo)記基因，因此如果要初步篩選出導(dǎo)入上述重組質(zhì)粒的某種細(xì)菌，則應(yīng)該在培養(yǎng)基中加入適量四環(huán)素．
故答案為：
（1）不同酶識(shí)別的序列不同  每一序列的雙鏈反向閱讀堿基序列相同（回文序列）
（2）②⑤
（3）EcoRI會(huì)破壞質(zhì)粒中的四環(huán)素抗性基因結(jié)構(gòu)
（4）2  
（5）3  
（6）復(fù)制  
（7）四環(huán)素

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合基因結(jié)構(gòu)圖和運(yùn)載體結(jié)構(gòu)圖，考查基因工程的技術(shù)和原理，重點(diǎn)是限制酶和DNA連接酶，要求考生認(rèn)真分析圖1和圖2，能根據(jù)圖中和表中信息選擇合適的限制酶，準(zhǔn)確判斷使用DNA連接酶連接的結(jié)果，再運(yùn)用所學(xué)的知識(shí)答題．