Question

【題目】將醋酸菌突變體中與耐酸有關的ALDH基因導入優(yōu)良醋酸菌中，選育出高發(fā)酵速率、耐酸的醋酸菌，用于果醋生產(chǎn)。請分析回答下列問題：

(1)對含有ALDH基因的DNA與質(zhì)粒用同種限制酶切割后，通過________酶連接形成重組質(zhì)粒。為獲得耐酸的醋酸菌，用________法接種于含高濃度醋酸的培養(yǎng)基進行篩選。將篩選純化的菌種用________的方法長期保存。

(2)下圖表示溫度和乙醇濃度對該醋酸菌產(chǎn)酸量的影響。

①醋酸菌能將乙醇轉變?yōu)?/span>________，再將其轉變?yōu)榇姿帷?/span>

②研究不同酒精濃度下的最高產(chǎn)酸量時，最好把溫度控制為________℃

③酒精發(fā)酵后通過出料口檢測酒精濃度，將發(fā)酵液中酒精濃度調(diào)節(jié)到4%左右才接種醋酸菌，較高的酒精濃度會使產(chǎn)酸量下降，不適宜接種，原因是_________________________。

(3)為檢測發(fā)酵過程中醋酸菌數(shù)量，將1 mL發(fā)酵液稀釋100倍后，分別取0.1 mL稀釋菌液均勻涂布在4個平板上經(jīng)適當培養(yǎng)后，4個平板上的菌落數(shù)分別為24、139、140、141，據(jù)此可得出每毫升發(fā)酵液中的活菌數(shù)為________個/mL。

Answer 1

【答案】 DNA連接 平板劃線(稀釋涂布平板) 甘油管藏 乙醛 35(30～35) (較)高濃度的酒精會抑制醋酸菌的生長和代謝 1.4×105

【解析】試題分析：本題考查微生物的培養(yǎng)、分離、基因工程，考查對微生物培養(yǎng)、分離方法和基因工程工具的理解。解答此題，可根據(jù)圖中坐標確定醋酸菌產(chǎn)酸的適宜溫度和酒精度，根據(jù)實驗目的確定實驗的自變量、無關變量。

(1)對含有ALDH基因的DNA與質(zhì)粒用同種限制酶切割后，通過DNA連接酶連接形成重組質(zhì)粒。篩選耐酸的醋酸菌，可將受體菌用平板劃線(稀釋涂布平板)法接種于含高濃度醋酸的培養(yǎng)基進行篩選。將篩選純化的菌種用甘油管藏的方法長期保存。

(2)①醋酸菌能將乙醇轉變?yōu)橐胰�，再將其轉變?yōu)榇姿帷?/span>

②研究不同酒精濃度下的最高產(chǎn)酸量時，溫度為無關變量，應保持適宜溫度，最好把溫度控制為35(30～35)℃。

③較高的酒精濃度(較)會抑制醋酸菌的生長和代謝，會使產(chǎn)酸量下降。

(3)計算每毫升發(fā)酵液中的活菌數(shù)，應選擇菌落數(shù)為30～300的培養(yǎng)基進行計數(shù)，培養(yǎng)基上的平均菌落數(shù)為（139+140+141）/3=140，則每毫升發(fā)酵液中的活菌數(shù)為140÷0.1×100=1.4×105個/mL。