Question

5．工業(yè)上青蒿素一般從青蒿植株中提取，產(chǎn)量低，價格高．基因工程及細(xì)胞工程等為培育出高青蒿素含量的青蒿提供了思路．科學(xué)家先通過紫外線處理大量青蒿幼苗后，偶然發(fā)現(xiàn)一株高產(chǎn)植株，通過基因測序發(fā)現(xiàn)該高產(chǎn)植株控制青蒿素合成相關(guān)的一種關(guān)鍵酶的基因發(fā)生了突變．
（1）提取了高產(chǎn)植株的全部DNA后，要想快速大量獲得該突變基因可以采用PCR技術(shù)，該技術(shù)的原理是DNA雙鏈復(fù)制．
（2）如果用青蒿某個時期mRNA反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生雙鏈cDNA片段，獲得的cDNA與青蒿細(xì)胞中該基因堿基序列不同（填“相同”或“不同”）．用某雙鏈cDNA進(jìn)行PCR擴增，進(jìn)行了30個循環(huán)后，理論上可以產(chǎn)生約為2³⁰個DNA分子片段．
（3）將獲得的突變基因?qū)�入普通青蒿之前，先�?gòu)建基因表達(dá)載體，圖l、2中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點．請回答：

用圖中的質(zhì)粒和外源DNA構(gòu)建重組質(zhì)粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是SmaⅠ會破壞質(zhì)粒的抗性基因及外源DNA中的目的基因，構(gòu)建好的重組質(zhì)粒在其目的基因前要加上特殊的啟動子，啟動子是RNA聚合酶識別結(jié)合位點．
（4）將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞采用最多的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，檢測目的基因是否發(fā)揮功能的第一步，需要檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA．最后還需要通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)培育出青蒿植株．

Answer 1

分析 1、PCR技術(shù)擴增目的基因
（1）原理：DNA雙鏈復(fù)制
（2）過程：第一步：加熱至90～95℃DNA解鏈；第二步：冷卻到55～60℃，引物結(jié)合到互補DNA鏈；第三步：加熱至70～75℃，熱穩(wěn)定DNA聚合酶從引物起始互補鏈的合成．
2、cDNA文庫和基因文庫的比較表：

文庫類型	cDNA	基因組文庫
文庫大小	小	大
基因中啟動子	無	有
基因中內(nèi)含子	無	有
基因多少	某種生物的部分基因	某種生物的全部基因
物種間的基因交流	可以	部分基因可以

3、目的基因的檢測與鑒定：（1）分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．（2）個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）PCR技術(shù)擴增目的基因的原理為DNA雙鏈復(fù)制．
（2）通過逆轉(zhuǎn)錄得到的目的基因中缺少基因結(jié)構(gòu)中的非編碼區(qū)以及編碼區(qū)的內(nèi)含子，因此獲得的cDNA與青蒿細(xì)胞中該基因堿基序列不同．由于PCR技術(shù)利用的是DNA雙鏈復(fù)制的原理，因此用該雙鏈cDNA進(jìn)行PCR擴增，進(jìn)行了30個循環(huán)后，理論上可以產(chǎn)生約為2³⁰個DNA分子．
（3）分析圖2可知，目的基因和抗生素抗性基因中都含有SmaⅠ限制酶的切割位點，用SmaⅠ切割會破壞質(zhì)粒的抗性基因及外源DNA中的目的基因，因此不能用SmaⅠ切割圖中的質(zhì)粒和外源DNA．構(gòu)建好的重組質(zhì)粒在其目的基因前要加上特殊的啟動子，啟動子是RNA聚合酶識別結(jié)合位點．
（4）將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；檢測目的基因是否發(fā)揮功能的第一步，需要檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA．將轉(zhuǎn)基因受體細(xì)胞培育成轉(zhuǎn)基因植株需要采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)．
故答案為：
（1）DNA雙鏈復(fù)制
（2）不同     2³⁰    
（3）SmaⅠ會破壞質(zhì)粒的抗性基因及外源DNA中的目的基因      RNA聚合酶
（4）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法       目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA       植物組織培養(yǎng)

點評 本題考查了基因工程的有關(guān)知識，要求考生能夠掌握PCR技術(shù)的原理和方法，區(qū)分基因組文庫和部分基因文庫的區(qū)別，能夠根據(jù)圖中限制酶的切割位點回答相關(guān)問題，同時識記目的基因檢測與鑒定的方法．