Question

19．為增加油菜種子的含油量，研究人員嘗試將酶D基因與位于葉綠體膜上的轉運肽基因相連，導入油菜葉片細胞并獲得了轉基因油菜品種．

（1）選用圖中的ClaI限制酶處理兩個基因后，再用DNA連接 酶處理，得到A、D（填圖中字母）端相連的融合基因．
（2）將上述融合基因插入如圖所示質(zhì)粒的T-DNA中，構建基因表達載體（重組質(zhì)粒），并導入農(nóng)桿菌中．將獲得的農(nóng)桿菌接種在含四環(huán)素的固體平板上培養(yǎng)得到含融合基因的單菌落，再利用培養(yǎng)基震蕩培養(yǎng)，可以得到用于轉化的浸染液．
（3）剪取油菜的葉片放入染液中一段時間后篩選獲得轉基因油菜細胞．該細胞通過植物組織培養(yǎng)技術，可培育成轉基因油菜植株．
（4）提取上述轉基因油菜的mRNA，在逆轉錄酶的作用下獲得cDNA，再利用融合基因的DNA片段設計引物進行擴增．對擴增結果進行檢測，可判斷融合基因是否完成轉錄．

Answer 1

分析 基因文庫包括cDNA文庫、基因組文庫等．某個群體包含一種生物所有的基因的文庫叫基因組文庫，而用某種生物發(fā)育的某個時期的mRNA反轉錄產(chǎn)生的多種互補DNA片段屬于cDNA文庫．

解答 解：（1）在上述引物設計時，分別在引物中加入如圖甲所示酶的識別序列，這樣可以用ClaⅠ限制酶和DNA連接酶處理兩個基因后，得到A、D端相連的融合基因．
（2）將上述融合基因插入圖乙所示Ti質(zhì)粒的T-DNA中，構建表達載體即重組質(zhì)粒并導入農(nóng)桿菌中．將獲得的農(nóng)桿菌接種在含四環(huán)素的固體平板上培養(yǎng)得到單菌落，再利用液體培養(yǎng)基震蕩培養(yǎng)，可以得到用于轉化的浸染液．
（3）剪取油菜的葉片放入染液中一段時間后篩選獲得轉基因油菜細胞．該細胞通過植物組織培養(yǎng)技術，可培育成轉基因油菜植株．
（4）提取上述轉基因油菜的mRNA，在逆轉錄酶的作用下獲得cDNA，再依據(jù)融合基因的DNA片段設計引物進行擴增，對擴增結果進行檢測，可判斷融合基因是否完成轉錄．
故答案為：
（1）Cla    I          A、D（全對才得分）
（2）基因表達載體（重組質(zhì)粒）   四環(huán)素
（3）植物組織培養(yǎng)
（4）融合基因    轉錄

點評 本題以增加油菜種子的含油量為材料背景，考查基因工程的相關知識，意在考查學生的識圖能力和判斷能力，運用所學知識綜合分析問題和解決問題的能力．