【題目】鈣依賴蛋白激酶(CDPK)在植物的信號傳導(dǎo)和提高植物抗性方面發(fā)揮著重要作用,科學(xué)家通過將CDPK基因?qū)霐M南芥中,來獲得具有抗性的新品種。下圖為某種質(zhì)粒表達(dá)載體和含CDPK基因的DNA片段示意圖,圖中標(biāo)記了限制酶的切割位點;卮鹣铝袉栴}。

1)基因工程中所用的目的基因可以人工合成,也可以從基因文庫中獲得;蛭膸彀_______________,為了使CDPK基因插入質(zhì)粒中,應(yīng)選取________________兩種限制性核酸內(nèi)切酶分別切割質(zhì)粒和含目的基因的DNA片段。

2)將獲取的CDPK基因進(jìn)行PCR擴增,目前在PCR反應(yīng)中使用Taq酶而不使用大腸桿菌DNA聚合酶主要原因是_____________________________________。

3)圖中所示的質(zhì)粒為Ti質(zhì)粒,操作過程中需要把CDFK基因插入到質(zhì)粒的T-DNA片段中,T-DNA片段在轉(zhuǎn)化中的作用是____________________________。為了檢測CDPK基因是否導(dǎo)入成功,可以用________________________________作探針檢測CDPK基因是否導(dǎo)入擬南芥細(xì)胞,導(dǎo)入成功的標(biāo)志是________________ 。

4)為研究CDPK基因表達(dá)載體對擬南芥的遺傳轉(zhuǎn)化的影響,將轉(zhuǎn)化后的擬南芥植株生長成熟后,采集其種子,播種于含________________________MS培養(yǎng)基中進(jìn)行抗性篩選。

5)基因工程的核心是_________________ ,目的是 ____________________________

【答案】基因組文庫和cDNA文庫 XbaⅠSmalⅠ Taq酶熱穩(wěn)定性高,而大腸桿菌DNA聚合酶在高溫下會失活 T-DNA片段能攜帶CDPK基因整合到受體細(xì)胞的染色體DNA 放射性同位素標(biāo)記的含有CDPK基因的DNA片段 顯示出雜交帶 卡那霉素 基因表達(dá)載體的構(gòu)建 使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在,并且可以遺傳給下一代,同時使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用

【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟:
1)目的基因的獲。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成。
2)基因表達(dá)載體的構(gòu)建:是基因工程的核心步驟,基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等。
3)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞:根據(jù)受體細(xì)胞不同,導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法;將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞最有效的方法是顯微注射法;將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。
4)目的基因的檢測與鑒定:分子水平上的檢測:應(yīng)用DNA分子雜交技術(shù)檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因;應(yīng)用分子雜交技術(shù)檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA應(yīng)用抗原-抗體雜交技術(shù)檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)。個體水平上的鑒定:抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

1)基因文庫包括基因組文庫和cDNA文庫,為了使CDPK基因插入質(zhì)粒中,選擇XbaⅠSmalⅠ能夠?qū)⒛康幕蛲暾邢拢⑶以谫|(zhì)粒的T-DNA片段中也有切點,而HindⅢ會影響目的基因的完整度,EcoRⅠ會破壞標(biāo)記基因。
2)將獲取的CDPK基因進(jìn)行PCR擴增,目前在PCR反應(yīng)中使用Taq酶而不使用大腸桿菌DNA聚合酶主要原因是Taq酶熱穩(wěn)定性高,而大腸桿菌DNA聚合酶在高溫下會失活。
3)圖中所示的質(zhì)粒為Ti質(zhì)粒,操作過程中需要把CDFK基因插入到質(zhì)粒的T-DNA片段中,T-DNA片段在轉(zhuǎn)化中的作用是T-DNA片段能攜帶CDPK基因整合到受體細(xì)胞的染色體DNA上;為了檢測CDPK基因是否導(dǎo)入成功,可以用放射性同位素標(biāo)記的含有CDPK基因的DNA片段作探針檢測CDPK基因是否導(dǎo)入擬南芥細(xì)胞,導(dǎo)入成功的標(biāo)志是顯示出雜交帶。
4)為研究CDPK基因表達(dá)載體對擬南芥的遺傳轉(zhuǎn)化的影響,將轉(zhuǎn)化后的擬南芥植株生長成熟后,采集其種子,播種于含卡那霉素的MS培養(yǎng)基中進(jìn)行抗性篩選,能成活的植株就是成功轉(zhuǎn)基因的擬南芥植株。
5)基因工程的核心是基因表達(dá)載體的構(gòu)建 ,目的是使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在,并且可以遺傳給下一代,同時使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。

練習(xí)冊系列答案
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A.曲線①②分別表示細(xì)胞置于蔗糖溶液和KNO3溶液中

B.曲線中細(xì)胞處于a時刻的細(xì)胞液濃度最大

C.曲線中細(xì)胞的吸水能力為ab

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四倍體蘭花葉片愈傷組織胚狀體蘭花植株

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B.②過程篩選出的雜交瘤細(xì)胞都能產(chǎn)生抗HCG抗體

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【題目】如圖是某神經(jīng)纖維動作電位的模式圖,下列敘述不正確的是(

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C.cd段電位下降的原因是K+的大量外流

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海南儋州市木棠鎮(zhèn)神沖村臨海的沙灘上,有幾處用火山石壘成的圍堰,漲潮時海水漫過圍堰,魚群隨著潮水進(jìn)入覓食;退潮后,不少魚蝦則被攔在了圍堰里.圍堰捕魚方式具有生態(tài)、保育功能,近年來該捕魚方式逐漸消失,慢慢湮沒在人們腦海的記憶里.下圖為圍堰石壩景觀圖。

簡述圍堰捕魚的生態(tài)、保育功能并分析圍堰捕魚逐漸消失的原因.

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B.混合物中醇與醛的質(zhì)量之比為53

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B.若生長素由向光側(cè)移向背光側(cè),則cdef,且e<f

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D.圖乙中的玉米苗尖端向左彎曲生長,其原因是背光側(cè)的細(xì)胞分裂較快

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BZ中的液體屬于組織液,其內(nèi)的神經(jīng)遞質(zhì)屬于內(nèi)環(huán)境的成分

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D刺激X或Y點引起的收縮不屬于反射

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