Question

9．日本的下修村、美國的沙爾菲和美籍華人錢永健因在研究綠色熒光蛋白（GFP）等方面的突出貢獻(xiàn)，獲得了2008年度諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)．GFP會發(fā)出綠色熒光，該蛋白質(zhì)在生物工程中有廣闊的應(yīng)用前景．請據(jù)圖回答：

（1）①過程中適用于體外大量擴(kuò)增DNA片段常用的方法是PCR，此方法中所用的酶是Taq酶，該酶具有耐高溫特點(diǎn)．
（2）②過程中必須用同種限制酶分別切割質(zhì)粒和綠色熒光蛋白基因，然后用DNA連接酶將二者拼接起來．
（3）重組后的質(zhì)粒上除了有啟動子、終止子、復(fù)制原點(diǎn)序列外，還應(yīng)有目的基因和標(biāo)記基因．
（4）在核移植過程中，供體細(xì)胞一般選用培養(yǎng)到10代以內(nèi)的轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞．
（5）⑤過程培養(yǎng)重組細(xì)胞時(shí)，必須模擬細(xì)胞在體內(nèi)生存的良好環(huán)境和物質(zhì)代謝過程，提供嚴(yán)格的無菌無毒條件、必須的營養(yǎng)物質(zhì)以及適宜的二氧化碳?xì)怏w，以維持培養(yǎng)液的PH．
（6）若對綠色熒光蛋白進(jìn)行改造，屬于蛋白質(zhì)工程的范疇，該方法直接操作的對象是DNA分子．
（7）圖示的各項(xiàng)技術(shù)中，能夠有效發(fā)揮優(yōu)良母畜繁殖潛能的技術(shù)是胚胎移植，通過此技術(shù)獲得的克隆兔，性狀與圖中的甲兔最相似．
（8）圖示的各項(xiàng)技術(shù)中，涉及到的細(xì)胞工程技術(shù)有動物細(xì)胞培養(yǎng)、動物體細(xì)胞核移植（至少兩項(xiàng)）．

Answer 1

分析 分析圖解，可以看出該熒光克隆兔涉及了多項(xiàng)生物工程技術(shù)．首先導(dǎo)入目的基因的甲兔的成纖維細(xì)胞要經(jīng)過動物細(xì)胞培養(yǎng)篩選出轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞，然后該細(xì)胞與乙兔的卵細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞核移植獲得重組細(xì)胞，重組細(xì)胞經(jīng)過早期胚胎培養(yǎng)到桑葚胚或囊胚期，最后經(jīng)過胚胎移植技術(shù)將早期胚胎移植到代孕母兔子宮內(nèi)，最后生成熒光克隆兔．該過程中利用基因工程、動物細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞核移植、早期胚胎培養(yǎng)和胚胎移植等技術(shù)．

解答 解：（1）①過程是目的基因的獲取，目的基因體外大量擴(kuò)增DNA片段常用PCR技術(shù)，需要耐高溫的Taq酶．
（2）②過程是構(gòu)建基因表達(dá)載體，必須用同種限制酶分別切割質(zhì)粒和綠色熒光蛋白基因，然后用DNA連接酶將二者拼接起來．
（3）重組質(zhì)粒上包含有啟動子、終止子、復(fù)制原點(diǎn)序列、目的基因和標(biāo)記基因．
（4）10代以內(nèi)的細(xì)胞一般能保持保持正常的二倍體核型，保證供體細(xì)胞正常的遺傳基礎(chǔ)，所以在核移植過程中，供體細(xì)胞一般選用培養(yǎng)到10代以內(nèi)的轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞．
（5）動物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，加入適宜的二氧化碳?xì)怏w的目的是維持培養(yǎng)液的PH．
（6）對綠色熒光蛋白進(jìn)行改造的方法屬于蛋白質(zhì)工程的范疇，直接操作的對象是DNA分子．
（7）圖示的各項(xiàng)技術(shù)中，能夠有效發(fā)揮優(yōu)良母畜繁殖潛能的技術(shù)是胚胎移植．由于細(xì)胞核來自于甲兔，所以通過此技術(shù)獲得的克隆兔性狀與圖中的甲兔最相似．
（8）圖示涉及到的細(xì)胞工程技術(shù)有動物細(xì)胞培養(yǎng)、動物體細(xì)胞核移植等．
故答案為：
（1）PCR   Taq酶   耐高溫
（2）同種限制酶      DNA連接酶
（3）目的基因   標(biāo)記基因
（4）10
（5）培養(yǎng)液的PH
（6）蛋白質(zhì)     DNA
（7）胚胎移植  甲
（8）動物細(xì)胞培養(yǎng)、動物體細(xì)胞核移植

點(diǎn)評 本題考查了生物工程中的相關(guān)技術(shù)，意在考查考生能識記并理解所學(xué)知識的要點(diǎn)，把握知識間的內(nèi)在聯(lián)系的能力；從題目所給的圖形中獲取有效信息的能力．