Question

13．已知某傳染性疾病的病原體為RNA病毒，該病毒表面的A蛋白為主要抗原．現(xiàn)利用該病毒通過基因工程和單克隆抗體制備技術(shù)來生產(chǎn)預(yù)防和診斷該疾病的疫苗和抗體，請(qǐng)回答下列問題：
（1）由該RNA病毒獲得A基因過程中發(fā)生的堿基互補(bǔ)配對(duì)為A-T，U-A，G-C，C-G．
（2）制備A蛋白過程的核心是構(gòu)建A基因表達(dá)載體，啟動(dòng)子和終止子也需要重新構(gòu)建，以能被受體細(xì)胞的
RNA聚合酶所識(shí)別，便于其催化轉(zhuǎn)錄過程．
（3）將提取的A蛋白重復(fù)注射到小鼠皮下細(xì)胞，目的是獲得更多的漿細(xì)胞（已免疫的B細(xì)胞），從而使獲得雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞的幾率大大增加，再通過擴(kuò)大培養(yǎng)提取單克隆抗體．
（4）對(duì)健康人進(jìn)行該傳染病免疫預(yù)防時(shí)，可選用提取的A蛋白來制備疫苗．對(duì)該傳染病疑似患者確診時(shí)，可以用（抗A蛋白）的單克隆抗體與分離出的病毒進(jìn)行特異性檢測(cè)．
（5）生態(tài)工程是一類少消耗、多效益、可持續(xù)的工程體系．沼氣工程利用的原理主要是物質(zhì)循環(huán)再生．

Answer 1

分析 1、基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．
2、單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應(yīng)，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞；誘導(dǎo)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行抗體檢測(cè)，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體．

解答 解：（1）該心A病毒的遺傳物質(zhì)是RNA，其通過逆轉(zhuǎn)錄過程獲得A基因，因此該過程中發(fā)生的堿基互補(bǔ)配對(duì)為A-T、U-A、G-C、C-G；A基因擴(kuò)增過程中的堿基配對(duì)方式為A-T、G-C、C-G、T-A．因此，由該心A病毒獲得A基因過程中發(fā)生的堿基互補(bǔ)配對(duì)為A-T、U-A、G-C、C-G、T-A．
（2）基因工程的核心步驟是構(gòu)建基因表達(dá)載體；RNA聚合酶能識(shí)別和結(jié)合啟動(dòng)子，催化轉(zhuǎn)錄過程．
（3）將提取的A蛋白重復(fù)注射到小鼠皮下細(xì)胞，目的是獲得更多的漿細(xì)胞，從而使獲得雜交瘤細(xì)胞的幾率大大增加，再通過擴(kuò)大培養(yǎng)提取單克隆抗體．
（4）根據(jù)題干信息“該病毒表面的A蛋白為主要抗原”可知，應(yīng)選用提取的A蛋白來制備疫苗．對(duì)該傳染病疑似患者確診時(shí)，可以采用抗原-抗體雜交法，即用（抗A蛋白的）單克隆抗體與分離出的病毒進(jìn)行特異性檢測(cè)．
（5）生態(tài)工程是一類少消耗、多效益、可持續(xù)的工程體系．沼氣工程利用的是生態(tài)工程的物質(zhì)循環(huán)再生原理．
故答案為：
（1）A-T，U-A，G-C，C-G
（2）RNA 聚合酶
（3）漿細(xì)胞（已免疫的B細(xì)胞），雜交瘤細(xì)胞
（4）A蛋白   （抗A蛋白）的單克隆抗體
（5）少消耗、多效益、可持續(xù)    物質(zhì)循環(huán)再生

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程和單克隆抗體制備的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)；識(shí)記單克隆抗體制備的過程，識(shí)記生態(tài)工程的概念，識(shí)記生態(tài)工程的目的，理解生態(tài)工程的基本原理，識(shí)記生態(tài)工程的優(yōu)點(diǎn)，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題．