Question

8．微生物的分離、培養(yǎng)和計數(shù)是現(xiàn)代生物工程應(yīng)用中的重要環(huán)節(jié)．圖為大腸桿菌分離和培養(yǎng)過程中部分操作示意圖．請分析回答下列問題：
（1）實驗過程中對培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、實驗操作者的雙手所采用的滅菌、消毒方法依次是高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌、化學(xué)消毒．
（2）培養(yǎng)大腸桿菌時，在接種前需要檢測培養(yǎng)基是否被污染．對于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測方法是將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生．
（3）圖示是利用平板劃線法進(jìn)行微生物接種，把聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面．在灼燒接種環(huán)之后，要等其冷卻后再進(jìn)行劃線的原因是以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種．
（4）關(guān)于圖示的操作方法和結(jié)果，敘述正確的是D．
A．操作前要將接種環(huán)放在火焰邊灼燒滅菌．
B．劃線操作須在火焰上進(jìn)行．
C．在5 區(qū)域中才可以提到所需菌落．
D．在1、2、3、4、5 區(qū)域中劃線前后都要對接種環(huán)滅菌．
（5）植物組織培養(yǎng)所用的MS培養(yǎng)基和微生物培養(yǎng)所配制的培養(yǎng)基的主要區(qū)別是MS培養(yǎng)基一般含植物激素，微生物培養(yǎng)基不含植物激素．某同學(xué)在進(jìn)行組織培養(yǎng)過程中，發(fā)現(xiàn)只分裂而不分化出芽和根，可能原因是細(xì)胞分裂素和生長素使用順序不對．

Answer 1

分析 1、無菌操作技術(shù)有消毒和滅菌，消毒有煮沸消毒法、巴氏消毒法和化學(xué)藥劑消毒法，滅菌有灼燒滅菌法適用于接種工具、干熱滅菌法適用于玻璃器皿和金屬工具、高壓蒸汽滅菌法適用于培養(yǎng)基及容器的滅菌．
2、接種最常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法，平板劃線分離法：由接種環(huán)以菌操作沾取少許待分離的材料，在無菌平板表面進(jìn)行平行劃線、扇形劃線或其他形式的連續(xù)劃線，微生物細(xì)胞數(shù)量將隨著劃線次數(shù)的增加而減少，并逐步分散開來，如果劃線適宜的話，微生物能一一分散，經(jīng)培養(yǎng)后，可在平板表面得到單菌落．
稀釋平板計數(shù)是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的單個菌落，即是由一個單細(xì)胞繁殖而成這一培養(yǎng)特征設(shè)計的計數(shù)方法，即一個菌落代表一個單細(xì)胞．計數(shù)時，首先將待測樣品制成均勻的系列稀釋液，盡量使樣品中的微生物細(xì)胞分散開，使成單個細(xì)胞存在（否則一個菌落就不只是代表一個細(xì)胞），再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中，使其均勻分布于平板中的培養(yǎng)基內(nèi)．

解答 解：（1）無菌操作技術(shù)有消毒和滅菌，消毒有煮沸消毒法、巴氏消毒法和化學(xué)藥劑消毒法，滅菌有灼燒滅菌法適用于接種工具、干熱滅菌法適用于玻璃器皿和金屬工具、高壓蒸汽滅菌法適用于培養(yǎng)基及容器的滅菌．
（2）培養(yǎng)大腸桿菌時，檢測培養(yǎng)基是否被污染的方法是將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生．
（3）接種有平板劃線法和稀釋平板法，本題是后者，反復(fù)把聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面，可以實現(xiàn)對菌種的分離，在操作過程中灼燒接種環(huán)之后，要等其冷卻后再進(jìn)行劃線的原因是以免接種環(huán)溫度太高殺死菌種；
（4）在1、2、3、4、5區(qū)域中劃線前后都要對接種環(huán)滅菌主要是稀釋作用；
（5）植物組織培養(yǎng)所用的MS培養(yǎng)基和微生物培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基的主要區(qū)別是MS培養(yǎng)基一般含植物激素，微生物培養(yǎng)基不含植物激素；在植物組織培養(yǎng)實驗中，植物激素的濃度、使用的先后順序以及用量的比例等都會影響實驗結(jié)果．
故答案為：
（1）高壓蒸汽滅菌  干熱滅菌  化學(xué)消毒
（2）將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生
（3）平板劃線   稀釋    以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種
（4）D
（5）MS培養(yǎng)基一般含植物激素，微生物培養(yǎng)基不含植物激素    細(xì)胞分裂素和生長素使用順序不對（或兩者濃度配比不對）

點評 微生物這部分內(nèi)容是高考試題的一個熱點一般體現(xiàn)在對生物工程中的應(yīng)用，考察的知識點有微生物的無菌操作、微生物的分離以及產(chǎn)品的提取，注意總結(jié)．