Question

6．請(qǐng)回答以下有關(guān)基因工程的問題．
（l）基因工程中切割DNA的工具酶是限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）．DNA連接酶根據(jù)其來源不同，分為E?coliDNA連接酶和T₄DNA連接酶
（2）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因的前提，是要有一段已知目的基因的核苷酸序列以便根據(jù)這一序列合成引物（引物對(duì)）
（3）基因表達(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的核心步驟．啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，它能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA．
（4）將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞采用最多的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法
（5）要檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的DNA上是否插入了目的基因，采用的方法是DNA分子雜交技術(shù)．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（l）基因工程中切割DNA的工具酶是限制性核酸內(nèi)切酶，DNA連接酶根據(jù)其來源不同可分為E?coliDNA連接酶和 T₄DNA連接酶，E•coliDNA連接酶來源于大腸桿菌，只能將雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端之間的磷酸二酯鍵連接起來；而T₄DNA連接酶來源于T₄噬菌體，可用于連接粘性末端和平末端．
（2）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因的前提，是要有一段已知目的基因的核苷酸序列以便根據(jù)這一序列合成引物．
（3）基因工程的核心步驟是基因表達(dá)載體的構(gòu)建．基因表達(dá)載體中含有啟動(dòng)子和終止子，啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，它能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA．
（4）將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞采用最多的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法．
（5）常用DNA分子雜交技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的DNA上是否插入了目的基因．
故答案為：
（1）限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）  E?coli DNA連接酶   T₄DNA連接酶
（2）引物（引物對(duì)）
（3）基因表達(dá)載體的構(gòu)建       RNA聚合酶
（4）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法
（5）DNA分子雜交

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的操作工具及具體的操作步驟，掌握各步驟中的相關(guān)細(xì)節(jié)，能結(jié)合題中信息準(zhǔn)確答題，屬于考綱識(shí)記和理解層次的考查．