Question

16．為解決塑料袋造成的“白色污染”這一問題，某同學(xué)試圖從土壤中尋找一種能加速塑料袋自然降解過程的目的菌，以下是該冊學(xué)從土壤中尋找并篩選目的菌的流程，請回答下列問題：
（1）對培養(yǎng)基滅菌常用的方法是高壓蒸汽滅菌法．在接種前需要檢測使用的培養(yǎng)基是否被污染，方法是將未接種的培養(yǎng)基在37℃（或適宜溫度）恒溫箱中培養(yǎng)一段時間，觀察是否有菌落生成．
（2）Ⅰ號培養(yǎng)基屬于選擇（按功能分）培養(yǎng)基，其作用是使目的菌能“脫穎而出”．如圖采用的接種方法為稀釋涂布平板法．Ⅱ號培養(yǎng)基從物理性質(zhì)來看，不能（填“能”或“不能”）添加瓊脂．
（3）該同學(xué)在稀釋倍數(shù)為10⁴的培養(yǎng)基中測得平板上菌落數(shù)的平均值為20.4，則每毫升樣品中的菌落數(shù)是1.02×10⁶個．（涂布平板時所用稀釋液的體積為0.2ml）
（4）假設(shè)該同學(xué)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上細(xì)菌數(shù)目過多而連成一片，說出一種可能的原因并提出合理的處理措施．原因：菌液濃度過高；措施：可以通過增大稀釋倍數(shù)解決．

Answer 1

分析 1、無菌操作技術(shù)有消毒和滅菌，消毒有煮沸消毒法、巴氏消毒法和化學(xué)藥劑消毒法，滅菌有灼燒滅菌法適用于接種工具、干熱滅菌法適用于玻璃器皿和金屬工具、高壓蒸汽滅菌法適用于培養(yǎng)基及容器的滅菌．
2、接種最常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法，平板劃線分離法：由接種環(huán)以菌操作沾取少許待分離的材料，在無菌平板表面進(jìn)行平行劃線、扇形劃線或其他形式的連續(xù)劃線，微生物細(xì)胞數(shù)量將隨著劃線次數(shù)的增加而減少，并逐步分散開來，如果劃線適宜的話，微生物能一一分散，經(jīng)培養(yǎng)后，可在平板表面得到單菌落．
稀釋平板計數(shù)是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的單個菌落，即是由一個單細(xì)胞繁殖而成這一培養(yǎng)特征設(shè)計的計數(shù)方法，即一個菌落代表一個單細(xì)胞．計數(shù)時，首先將待測樣品制成均勻的系列稀釋液，盡量使樣品中的微生物細(xì)胞分散開，使成單個細(xì)胞存在（否則一個菌落就不只是代表一個細(xì)胞），再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中，使其均勻分布于平板中的培養(yǎng)基內(nèi)．

解答 解：（1）培養(yǎng)基常采用高壓蒸汽滅菌法進(jìn)行滅菌．在接種前需要檢測使用的培養(yǎng)基是否被污染，可以將未接種的培養(yǎng)基在37℃（或適宜溫度）恒溫箱中培養(yǎng)一段時間，觀察是否有菌落生成，若有菌落生成，則已經(jīng)被污染，否則沒有被污染．
（2）要篩選能降解聚乙烯塑料的微生物，應(yīng)選擇以聚乙烯塑料為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基．圖Ⅱ號培養(yǎng)基上采用的接種方法為稀釋涂布平板法．Ⅱ號培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，因此不需要加凝固劑--瓊脂．
（3）根據(jù)題意可知，每克樣品中的菌落數(shù)=平板上菌落數(shù)的平均值÷體積×稀釋倍數(shù)=20.4÷0.2×10⁴=1.02×10⁶個．
（4）如果培養(yǎng)基上細(xì)菌數(shù)目過多連成一片，可能的原因是菌液濃度過高或操作過程不是無菌操作，還可能是接種時沒有把細(xì)菌分散開，采取的措施有：可以通過增大稀釋倍數(shù)解決（或培養(yǎng)過程中被雜菌污染；嚴(yán)格無菌操作程序．或利用接種針劃線時，劃下一個區(qū)域前沒有對接種針滅菌處理；每劃一個新的區(qū)域都要對接種針進(jìn)行滅菌處理）．
故答案為：
（1）高壓蒸汽滅菌法　將未接種的培養(yǎng)基在37℃（或適宜溫度）恒溫箱中培養(yǎng)一段時間，觀察是否有菌落生成
（2）選擇　稀釋涂布平板法　不能
（3）1.02×10⁶
（4）菌液濃度過高     可以通過增大稀釋倍數(shù)解決 （或培養(yǎng)過程中被雜菌污染；嚴(yán)格無菌操作程序．或利用接種針劃線時，劃下一個區(qū)域前沒有對接種針滅菌處理；每劃一個新的區(qū)域都要對接種針進(jìn)行滅菌處理）

點評 微生物這部分內(nèi)容是高考試題的一個熱點一般體現(xiàn)在對生物工程中的應(yīng)用，考查的知識點有微生物的無菌操作、微生物的分離以及產(chǎn)品的提取，注意總結(jié)．