Question

根據(jù)模擬制作重組DNA分子的活動，甲DNA分子、乙DNA分子被EcoRI酶切后，即可獲得所需的目的基因和質(zhì)粒，回答以下問題：（已知EcoRI酶識別序列為GAATTC，識別位點(diǎn)為G||A）

（1）綠色硬紙板（甲DNA分子）的堿基序列為：      

……ATAGCATGCTATCCATGAATTCGGCATAC……     

……TCCTAGAATTCTCGGTATGAATTCCATAC……

紅色硬紙板（乙DNA分子）的堿基序列為：

  ……TATCGTACGATAGGTACTTAAGCCGTATG……      

……AGGATCTTAAGAGCCATACTTAAGGTATG……      

其中，           DNA分子含有“目的基因”，            DNA分子是“質(zhì)粒”。

（2）用剪刀代表進(jìn)行切割。酶切位點(diǎn)在         （a處還是b處），此化學(xué)鍵稱為              。

（3）請用“||”在甲、乙兩DNA分子上標(biāo)出EcoRI的作用位點(diǎn)。

    

（4）從基因文庫中獲取目的基因是常用方法，基因文庫實(shí)際上就是指導(dǎo)入了某種生物不同基因的許多DNA片斷的                         的群體。按照其中所含基因的量又可分為               文庫和              文庫。

（5）基因表達(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的關(guān)鍵步驟之一，請根據(jù)所給的條件完成下列問題：

     已知有4種限制性核酸內(nèi)切酶，其中1號和4號切割DNA后產(chǎn)生的是平末端，2和3號酶產(chǎn)生的是黏性末端。含目的基因的DNA片段和質(zhì)粒的酶切序列如下圖所示：

 

 

① 請?jiān)O(shè)計(jì)酶切方案，構(gòu)建最佳基因表達(dá)載體（重組質(zhì)粒）                                                                     。

②該重組質(zhì)粒上有幾個(gè)復(fù)制原點(diǎn)：    ，能用PCR技術(shù)擴(kuò)增嗎      （能或不能）

③若用酶2和3切割重組質(zhì)粒，可以得到幾個(gè)DNA片段：         。

  若用酶2和1切割重組質(zhì)粒，可以得到幾個(gè)DNA片段：         。

Answer 1

（1）乙，   甲．  

（2）a處，     磷酸二酯鍵

（3） 綠色硬紙板（DNA分子甲）的堿基序列為：（2分）

 ……ATAGCATGCTATCCATG|| AATTCGGCATAC……

  ……TATCGTACGATAGGTACTTAA||GCCGTATG……

紅色硬紙紙（DNA分子乙）的堿基序列為：

  ……TCCTAG||AATTCTCGGTATG||AATTCCATAC……

  ……AGGATCTTAA||GAGCCATACTTAA||GGTATG……

   （4）受體菌     基因組       部分基因

   （5) ①目的基因：用酶2和4切割，質(zhì)粒用酶1和2切割，由于1和4切出的是平末端，可以相連，因而目的基因可以與質(zhì)粒重組。

②一個(gè)   不能

③2個(gè)   1個(gè)