Question

生物柴油是一種可再生的清潔能源，其應(yīng)用在一定程度上能夠減緩人類對化石燃料的消耗，科學(xué)家發(fā)現(xiàn)，在微生物M（單細胞）產(chǎn)生的脂肪酶作用下，植物油與甲醇反應(yīng)能夠合成生物柴油（如圖1）．

（1）篩選產(chǎn)脂肪酶的微生物M時，應(yīng)用

 

培養(yǎng)基，可以在培養(yǎng)基中添加

 

作為唯一碳源．
培養(yǎng)基滅菌采用的最適方法是

 

法．
（2）圖2是采用純化微生物M培養(yǎng)的兩種接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖，則獲得圖A效果的接種方法是

 

，圖B效果的接種方法是

 

．接種后應(yīng)注意培養(yǎng)基要

 

放置．
（3）若需人工大量克隆脂肪酶基因，可應(yīng)用

 

技術(shù)，該過程需要的特殊酶是

 

．
（4）獲得微生物M以后，若要用于生產(chǎn)，還需要進行擴大培養(yǎng)，培養(yǎng)后若想計算微生物M的密度，一般用

 

法進行計數(shù)．微生物M產(chǎn)生的脂肪酶可以用

 

試劑進行檢測．

Answer 1

考點：培養(yǎng)基對微生物的選擇作用,微生物的分離和培養(yǎng),測定某種微生物的數(shù)量

專題：

分析：篩選分離目的菌時應(yīng)該使用只有目的菌能夠生存的，其他微生物不能生存的選擇培養(yǎng)基，培養(yǎng)基制作完成后應(yīng)該進行高壓蒸汽滅菌．常用的固體培養(yǎng)基上接種的方法是稀釋涂布平板法和平板劃線法．人工大量克隆脂肪酶基因可以用PCR技術(shù)．

解答： 解：（1）篩選產(chǎn)脂肪酶的微生物M時，應(yīng)該使用只有目的菌能夠生存的，其他微生物不能生存的選擇培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中應(yīng)該添加植物油作為唯一碳源．
（2）據(jù)圖分析：圖A的接種方法是稀釋涂布平板法，圖B的接種方法是平板劃線法，為防止接種后水蒸氣凝集呈水滴滴入培養(yǎng)基而污染，需要將培養(yǎng)皿倒置．
（3）在應(yīng)用PCR技術(shù)擴增DNA片段時，DNA合成（延伸）時溫度要控制在72℃，需要具有較強的耐熱性的DNA聚合酶催化．
（4）計算微生物M的密度，一般用顯微計數(shù)法（血球計數(shù)法）法進行計數(shù)，脂肪酶的本質(zhì)是蛋白質(zhì)，可以用雙縮脲檢測．
故答案為：
（1）選擇   植物油   高壓蒸汽滅菌   
（2）稀釋涂布平板法   平板劃線法   倒置
（3）PCR   耐熱DNA聚合酶    
（4）顯微計數(shù)法（血球計數(shù)法）   雙縮脲

點評：本題主要考查微生物的篩選分離和PCR技術(shù)，意在強化相關(guān)知識點的識記與理解．