Question

（11分）目前基因工程所用的質(zhì)粒載體主要是以天然細(xì)菌質(zhì)粒的各種元件為基礎(chǔ)重新組建的人工質(zhì)粒，pBR322質(zhì)粒是較早構(gòu)建的質(zhì)粒載體，其主要結(jié)構(gòu)如圖一所示。

(1)構(gòu)建人工質(zhì)粒時(shí)要有抗性基因，以便于________。觀察上圖，如果A為質(zhì)粒，則C表示        。

(2)pBR322分子中有單個(gè)EcoRⅠ限制酶作用位點(diǎn)，EcoRⅠ只能識(shí)別序列—GAATTC—，并只能在G與A之間切割。若在某目的基因的兩側(cè)各有1個(gè)EcoRⅠ的切點(diǎn)，請(qǐng)畫(huà)出目的基因兩側(cè)被限制酶EcoRⅠ切割后所形成的黏性末端。

_______________________________________________________________________

(3)pBR322分子中另有單個(gè)的BamHⅠ限制酶作用位點(diǎn)，現(xiàn)將經(jīng)BamHⅠ處理后的質(zhì)粒與用另一種限制酶BglⅡ處理得到的目的基因，通過(guò)____________作用恢復(fù)________________________鍵，成功地獲得了重組質(zhì)粒。能形成重組質(zhì)粒的原因是_______________________________________________________________________

 (4) 作為受體大腸桿菌應(yīng)不含_______________________，以方便篩選已導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體大腸桿菌。將大腸桿菌在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖二的菌落。再將滅菌絨布按到培養(yǎng)基上，使絨布面沾上菌落，然后將絨布按到含四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖三的結(jié)果(空圈表示與圖二對(duì)照無(wú)菌落的位置)。與圖三空圈相對(duì)應(yīng)的圖二中的菌落表現(xiàn)型是_______，圖三結(jié)果顯示，多數(shù)大腸桿菌導(dǎo)入的是______________。

（5）基因工程中使用的限制酶，其特點(diǎn)是_______________________，下圖四種質(zhì)粒含有E1和E2兩種限制酶的識(shí)別，Apr表示抗青霉素的抗性基因，Tcr表示抗四環(huán)素的抗性基因。

 

將兩端用E1切開(kāi)的Tcr基因與用E1切開(kāi)的質(zhì)粒X－1混合連接，連接后獲得的質(zhì)粒類型有＿＿＿。（可多選）A．X－1  B．X－2   C．X－3   D．X－4

 

Answer 1

【答案】

（11分） (1)篩選(鑒別目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞)   重組質(zhì)粒　

(2)

(3) DNA連接酶  磷酸二酯　兩種限制酶(BamHⅠ和BglⅡ)切割得到的黏性末端相同   （或 兩者結(jié)構(gòu)上相似，有互補(bǔ)的堿基序列）

(4) amp^R和tet^R（或氨芐青霉素抗性基因和四環(huán)素抗性基因）能抗氨芐青霉素，但不能抗四環(huán)素 pBR322 質(zhì)粒（5）特異性識(shí)別和切割DNA＿＿。ABC

【解析】略