Question

【題目】大腸桿菌是人和動物腸道中普遍存在的一種兼性厭氧菌，在無氧條件下，大腸桿菌通過發(fā)酵能將葡萄糖轉變?yōu)槎喾N有機酸并產生CO2等氣體。某研究機構使用“濾膜法”對受污染的河流水體進行了大腸桿菌活菌數(shù)目的測定。請回答下列問題：

（1）研究人員向培養(yǎng)大腸桿菌的葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)液中加入適量的溴麝香草酚藍水溶液，培養(yǎng)一段時間后，可觀察到溶液顏色的變化為_____________________________。為了鑒別大腸桿菌菌落，可向培養(yǎng)基中加入_________________作為指示劑。

（2）研究人員采用稀釋涂布平板法檢測水樣中細菌含量。在涂布接種前，隨機取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時間，這樣做的目的是_____________________________。

（3）為了便于統(tǒng)計污染嚴重的水體中活菌的數(shù)目，需將水樣進行適當稀釋，例如取水樣1mL加入無菌水_________mL制備稀釋倍數(shù)為102的稀釋液，并照此依次制備更高倍數(shù)的稀釋液。每個稀釋倍數(shù)的菌液取10mL進行過濾，然后將濾膜放置在培養(yǎng)基上。為了防止雜菌污染，稀釋、過濾和旋轉濾膜等操作都應該在__________________附近進行。

（4）將放有濾膜的平板置于適宜條件下培養(yǎng)，每隔12h統(tǒng)計一次菌落數(shù)目，應選取菌落數(shù)目_________時的記錄作為結果。如果經過培養(yǎng)后稀釋倍數(shù)為102的4個平板上菌落數(shù)分別為43、47、42、48，那么每升河水中約含大腸桿菌_________個。用這種法測定的細菌數(shù)量比實際活菌數(shù)量要少，這是因為____________________________________________________

Answer 1

【答案】由藍變綠再變黃 伊紅-美藍 檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格 99 酒精燈火焰 穩(wěn)定 4.5×105 當兩個或多個細菌連在一起時，平板上觀察到的是一個菌落

【解析】

由題干“在無氧條件下，大腸桿菌通過發(fā)酵能將葡萄糖轉變?yōu)槎喾N有機酸并產生CO2等氣體”可知，葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)液中加入適量的溴麝香草酚藍培養(yǎng)一段時間的大腸桿菌，可產生CO2氣體；稀釋涂布平板法進行對微生物計數(shù)時，當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，統(tǒng)計培養(yǎng)的菌落數(shù)目時應選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結果，通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品大約含有多少活菌。

（1）向葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)液中加入適量的溴麝香草酚藍培養(yǎng)一段時間的大腸桿菌，可產生CO2氣體，CO2可使溴麝香草酚藍水溶液由藍變綠再變黃。伊紅美藍是專一鑒別大腸桿菌的指示劑，為了鑒別大腸桿菌菌落，可向培養(yǎng)基中加入伊紅美藍作為指示劑。

（2）在涂布接種前，隨機取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時間，這樣做的目的是檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格，如果空白平板上由菌落產生，說明滅菌不合格。

（3）用稀釋涂布平板法進行對微生物計數(shù)時，當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品大約含有多少活菌，若將水樣稀釋102倍，可取水樣1mL加入到99mL的無菌水中進行稀釋；為了防止雜菌污染，整個操作過程應進行無菌操作，所以在稀釋、過濾和旋轉濾膜等操作時都應該在酒精燈火焰附近進行。

（4）統(tǒng)計培養(yǎng)的菌落數(shù)目時應選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結果，如果經過培養(yǎng)后稀釋倍數(shù)為102的4個平板上菌落數(shù)分別為43、47、42、48，則平板上平均菌落數(shù)=（43+47+42+48）÷4=45個，每毫河水中約含大腸桿菌數(shù)=（C÷V）×M=（45÷0.1）×102=4.5×104個，每升河水中約含大腸桿菌數(shù)=4.5×104×103=4.5×107個；用稀釋涂布平板法測定的細菌數(shù)量比實際活菌數(shù)量要少，這是因為當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的是一個菌落。