Question

在培育轉(zhuǎn)基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因（kan）常作為標(biāo)記基因，只有含卡那霉素抗性基因的細(xì)胞才能在卡那霉素培養(yǎng)基上生長(zhǎng)．如圖為獲得抗蟲(chóng)棉的技術(shù)流程．請(qǐng)據(jù)圖回答：

（1）A過(guò)程需要的酶有

 

．
（2）要把重組質(zhì)粒導(dǎo)入土壤農(nóng)桿菌，首先必須用

 

處理土壤農(nóng)桿菌，使土壤農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)變?yōu)?div id="pn11l9z" class='quizPutTag' contenteditable='true'> 

態(tài)；然后將

 

在緩沖液中混合培養(yǎng)完成轉(zhuǎn)化過(guò)程．
（3）含有重組質(zhì)粒的土壤農(nóng)桿菌侵染離體棉花葉片組織后，將離體棉花葉片組織培養(yǎng)成再生植株要經(jīng)過(guò)[C]

 

和[E]

 

．如要確保再生植株中含有抗蟲(chóng)基因，可在C過(guò)程的培養(yǎng)基中加入

 

．
（4）如想利用分子雜交技術(shù)檢測(cè)再生植株中的抗蟲(chóng)基因是否轉(zhuǎn)錄，應(yīng)該用放射性同位素標(biāo)記的目的基因作為探針與

 

雜交．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù),植物培養(yǎng)的條件及過(guò)程

專(zhuān)題：

分析：分析題圖：圖示為利用生物技術(shù)獲得生物新品種的過(guò)程示意圖，其中A表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程；B表示用選擇培養(yǎng)基篩選含有重組質(zhì)粒的土壤農(nóng)桿菌的過(guò)程；C表示脫分化過(guò)程；D為愈傷組織；E表示再分化過(guò)程．

解答： 解：（1）圖中A為基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程，該過(guò)程需要限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和運(yùn)載體，還需DNA連接酶將目的基因和運(yùn)載體連接形成重組質(zhì)粒．
（2）將重組質(zhì)粒導(dǎo)入微生物細(xì)胞時(shí)，常采用感受態(tài)細(xì)胞法，即首先用Ca²⁺處理微生物細(xì)胞，使之成為易于吸收周?chē)�環(huán)境中DNA分子的感受態(tài)細(xì)胞；然后將將重組質(zhì)粒和感受態(tài)細(xì)胞在緩沖液中混合培養(yǎng)完成轉(zhuǎn)化過(guò)程．
（3）將離體棉花葉片組織培養(yǎng)成再生植株還需要采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，該技術(shù)包括脫分化和再分化兩個(gè)過(guò)程．由圖可知，標(biāo)記基因時(shí)卡那霉素抗性基因，因此可用含有卡那霉素的培養(yǎng)基篩選含有抗蟲(chóng)基因的再生植株．
（4）檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA常采用分子雜交技術(shù)，即以標(biāo)記的目的基因?yàn)樘结樑cmRNA分子雜交．
故案為：
（1）（同一種）限制酶、DNA連接酶
（2）Ca²⁺    感受    將重組質(zhì)粒和感受態(tài)細(xì)胞
（3）脫分化、再分化   卡那霉素
（4）mRNA

點(diǎn)評(píng)：本題結(jié)合轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)植株的培育過(guò)程圖，考查基因工程和植物組織培養(yǎng)的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的工具及操作步驟，能準(zhǔn)確判斷圖中各過(guò)程的名稱(chēng)；識(shí)記植物組織培養(yǎng)的過(guò)程及應(yīng)用，能結(jié)合圖中信息答題．