Question

【題目】隨著人類基因組計(jì)劃的進(jìn)展以及多種生物基因測(cè)序工作的完成，人類跨入了蛋白質(zhì)時(shí)代。對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行研究和應(yīng)用，首先需要獲得高純度的蛋白質(zhì)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）蛋白質(zhì)的提取和分離一般分為四步：樣品處理、_____、_____和純度鑒定。

（2）凝膠色譜法：是根據(jù)_______________的有效方法．所用凝膠的化學(xué)本質(zhì)大多為____________。SDS﹣聚丙烯酰胺凝膠電泳消除了凈電荷對(duì)遷移率的影響，使電泳遷移率完全取決于_____。

（3）粗分離中透析的目的是________，若要盡快達(dá)到理想的透析效果，可以_______。

（4）裝填凝膠色譜柱時(shí)，凝膠必須裝填緊密，原因是_____________________，色譜柱制作成功的標(biāo)志是__________________。

Answer 1

【答案】粗分離 純化 相對(duì)分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì) 多糖類化合物 分子的大小 去除相對(duì)分子質(zhì)量較小的雜質(zhì) 及時(shí)更換緩沖液或增加緩沖液的量 如果凝膠裝填得不夠緊密、均勻，就會(huì)在色譜柱內(nèi)形成無(wú)效的空隙，使本該進(jìn)入凝膠內(nèi)部的樣品分子從這些空隙中通過(guò)，攪亂洗脫液的流動(dòng)次序，影響分離的效果 紅色區(qū)帶均勻一致的移動(dòng)

【解析】

血紅蛋白提取和分離的程序可分為四大步，包括：樣品處理、粗分離、純化和純度鑒定。首先通過(guò)洗滌紅細(xì)胞、血紅蛋白的釋放、離心等操作收集到血紅蛋白溶液，即樣品的處理；再經(jīng)過(guò)透析去除分子量較小的雜質(zhì)，即樣品的粗分離；然后通過(guò)凝膠色譜法將相對(duì)分子質(zhì)量大的雜質(zhì)蛋白除去，即樣品的純化；最后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行純度鑒定。

（1）血紅蛋白的提取和分離的程序可分為四大步，包括：樣品處理、粗分離、純化和純度鑒定。

（2）樣品純化是通過(guò)凝膠色譜法（分配色譜法）去掉分子量較大的雜質(zhì)。凝膠色譜法是根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量大小分離蛋白質(zhì)的有效方法，相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程長(zhǎng)，移動(dòng)的速度慢，相對(duì)分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)不容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程短，移動(dòng)的速度快。

（3）血紅蛋白溶液的粗分離采用的方法是透析，即將收集的血紅蛋白溶液放在透析袋中進(jìn)行透析，去掉分子量較小的雜質(zhì)，原理是小分子雜質(zhì)可以通過(guò)透析袋進(jìn)入緩沖液中，血紅蛋白分子量較大，不能通過(guò)透析袋進(jìn)入緩沖溶液。若要盡快達(dá)到理想的透析效果，可以及時(shí)更換緩沖液或增加緩沖液的量。

（4）如果凝膠裝填得不夠緊密、均勻，就會(huì)在色譜柱內(nèi)形成無(wú)效的空隙，使本該進(jìn)入凝膠內(nèi)部的樣品分子從這些空隙中通過(guò)，攪亂洗脫液的流動(dòng)次序，影響分離的效果，因此，裝填凝膠色譜柱時(shí)，凝膠必須裝填緊密。色譜柱制作成功的標(biāo)志是：紅色區(qū)帶均勻一致的移動(dòng)。