Question

GDNF是一種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子。對(duì)損傷的神經(jīng)細(xì)胞具有營(yíng)養(yǎng)和保護(hù)作用。研究人員構(gòu)建了含GDNF基因的表達(dá)載體（如圖所示），并導(dǎo)入到大鼠神經(jīng)干細(xì)胞中，用于干細(xì)胞基因治療的研究。請(qǐng)回答：

（1）完成圖中A過(guò)程必需的工具是 ；該基因治療的受體細(xì)胞為 。

（2）基因工程最核心的步驟是 。

（3）若要構(gòu)建含GDNF基因的表達(dá)載體，則需選擇圖中的 限制酶進(jìn)行酶切。

（4）限制酶XhoI和限制酶HpaI的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)分別是—C↓AATTG—和—G↓AATTC—。如下圖表示四種質(zhì)粒,其中,箭頭所指部位為酶的識(shí)別位點(diǎn),質(zhì)粒的陰影部分表示標(biāo)記基因。適于作為圖示GDNF基因運(yùn)載體的是 。

（5）下列有關(guān)限制性核酸內(nèi)切酶和質(zhì)粒運(yùn)載體的描述，正確的是_______。

A．限制性核酸內(nèi)切酶能識(shí)別DNA、切割DNA任一序列

B．限制性核酸內(nèi)切酶的作用部位與RNA聚合酶的相同

C．使用質(zhì)粒運(yùn)載體是為了避免目的基因被分解

D．質(zhì)粒運(yùn)載體可能是從細(xì)菌或者病毒的DNA改造的

（6）經(jīng)酶切后的載體和GDNF基因進(jìn)行連接，連接產(chǎn)物經(jīng)篩選得到的載體主要有三種：?jiǎn)蝹�(gè)載體自連、GDNF基因與載體正向連接、GDNF基因與載體反向連接（如圖所示）。為鑒定這3種連接方式，選擇HpaI酶和BamHI酶對(duì)篩選的載體進(jìn)行雙酶切，若是正向連接的重組載體，其產(chǎn)生的酶切片段數(shù)為 個(gè)，反向連接的重組載體產(chǎn)生片段有 （多選）。

①100bp ②200bp ③600bp ④700bp ⑤6000bp ⑥6500bp

Answer 1