Question

番茄含有豐富的維生素，但不耐儲(chǔ)存，研究者發(fā)現(xiàn)一種耐儲(chǔ)存基因能使果實(shí)長(zhǎng)期儲(chǔ)存，想用基因工程的方法把耐儲(chǔ)存基因轉(zhuǎn)入到番茄體內(nèi)．回答下列問(wèn)題：
（1）用PCR技術(shù)擴(kuò)增耐儲(chǔ)存基因．PCR反應(yīng)體系的配方為：磷酸緩沖液，四種脫氧核苷酸，兩種引物，耐高溫的DNA聚合酶，

 

．在PCR技術(shù)中，耐高溫的DNA聚合酶只能特異地復(fù)制處于

 

，使這段固定長(zhǎng)度的序列呈指數(shù)擴(kuò)增．
（2）用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法把耐儲(chǔ)存基因?qū)�入番茄的體細(xì)胞中．把耐儲(chǔ)存基因插在Ti質(zhì)粒的T-DNA中構(gòu)建含耐儲(chǔ)存基因的重組Ti質(zhì)粒，然后把含耐儲(chǔ)存基因的重組Ti質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌中，通過(guò)

 

的作用就可以把含耐儲(chǔ)存基因的農(nóng)桿菌篩選出來(lái)，再用這樣的農(nóng)桿菌去感染番茄體細(xì)胞，借助T-DNA的作用就可以把耐儲(chǔ)存基因插入到番茄體細(xì)胞的染色體DNA上．
（3）用

 

將含耐儲(chǔ)存基因的番茄體細(xì)胞培養(yǎng)成番茄植株，該番茄植株體細(xì)胞含耐儲(chǔ)存基因，用

 

的方法可以檢測(cè)出耐儲(chǔ)存基因在番茄果實(shí)細(xì)胞中是否完成表達(dá)．

Answer 1

考點(diǎn)：PCR技術(shù)的基本操作和應(yīng)用,基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：1、PCR反應(yīng)體系的配方是：10倍濃縮擴(kuò)增緩沖液5ml，20mmol/L的四種脫氧核苷酸的等量混合液1ml，20umol/L的兩種引物各2.5uL，水28～33ml，1～5umol/L的高溫的DNA聚合酶，模板DNA；
2、PCR反應(yīng)過(guò)程中DNA聚合酶只能特異性的復(fù)制處于兩個(gè)引物之間的DNA序列，使這段固定長(zhǎng)度的序列呈知識(shí)擴(kuò)增；
3、將含耐儲(chǔ)存基因的番茄體細(xì)胞培養(yǎng)成番茄植株的原理是細(xì)胞的全能性，應(yīng)用的技術(shù)是植物組織培養(yǎng)．

解答： 解：（1）PCR反應(yīng)體系配方除了磷酸緩沖液，四種脫氧核苷酸，兩種引物，耐高溫的DNA聚合酶之外，還應(yīng)該有模板DNA；在PCR技術(shù)中，耐高溫的DNA聚合酶只能特異地復(fù)制處于兩個(gè)引物之間的DNA序列，使這段固定長(zhǎng)度的序列呈指數(shù)擴(kuò)增．
（2）由于質(zhì)粒中含有標(biāo)記基因，導(dǎo)入重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌中具有標(biāo)記基因，因此可以通過(guò)檢測(cè)標(biāo)記基因把含耐儲(chǔ)存基因的農(nóng)桿菌篩選出來(lái)．
（3）將導(dǎo)入耐儲(chǔ)存基因的番茄體細(xì)胞培養(yǎng)成番茄植株所用的技術(shù)是植物組織培養(yǎng)；用抗原-抗體雜交的方法可以檢測(cè)出耐儲(chǔ)存基因在番茄果實(shí)細(xì)胞中是否完成表達(dá)．
故答案為：
（1）DNA模板（耐儲(chǔ)存基因）    兩個(gè)引物之間的DNA序列
（2）標(biāo)記基因
（3）植物組織培養(yǎng)技術(shù)    抗原-抗體雜交

點(diǎn)評(píng)：本題的知識(shí)點(diǎn)是PCR技術(shù)及應(yīng)用，基因工程技術(shù)及應(yīng)用，植物組織培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用，旨在考查學(xué)生理解所學(xué)知識(shí)的要點(diǎn)，把握知識(shí)的內(nèi)在聯(lián)系并應(yīng)用相關(guān)知識(shí)綜合解決問(wèn)題的能力．