Question

14．石油污染土壤的微生物修復技術以效率高、治理費用低和現(xiàn)場可操作性強的特點得到廣泛研究和應用．回答相關問題：
（1）土壤中含有分解石油的多種微生物，向多孔結構的污染土壤中通入空氣，可使微生物的代謝（或有氧呼吸）增強，同時由于石油主要含有碳和氫，因此還需加入適量含氮和磷元素的物質促進微生物的生長繁殖，進而加快石油污染物的降解．
（2）為了得到能夠分解石油的單一假單胞菌（細菌的一種），所用的培養(yǎng)基只能以石油為唯一碳源；純化菌株常用平板劃線法或稀釋涂布平板法．
（3）土壤中分解石油的微生物數(shù)量直接影響治理的效果，因此常開展計數(shù)工作．實際操作中通常選用一定稀釋范圍的土壤樣品液進行培養(yǎng)，目的是保證獲得菌落數(shù)為30-300的平板進行計數(shù)，這種方法統(tǒng)計的結果＜（填“＞”或“=”或“＜”）活菌的實際數(shù)目，原因是兩個或多個細菌細胞連在一起時，平板上只能觀察到一個菌落．

Answer 1

分析 1、培養(yǎng)基按功能分：

種類	制備方法	特征	用途
選擇培養(yǎng)基	培養(yǎng)基中加入某種化學成分	根據(jù)某種微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某化學、物理因素的抗性而設計的培養(yǎng)基使混合菌樣中的劣勢菌變成優(yōu)勢菌，從而提高該菌的篩選率	加入青霉素分離得到酵母菌和霉菌
鑒別培養(yǎng)基	加入某種試劑或化學藥品	依據(jù)微生物產生的某種代謝產物與培養(yǎng)基中特定試劑或化學藥品反應，產生明顯的特征變化而設計	鑒別和區(qū)分菌落相似的微生物伊紅和美藍培養(yǎng)基可以鑒別大腸桿菌

2、微生物常見的接種的方法
①平板劃線法：將已經熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經培養(yǎng)后可形成單個菌落．
3、統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法
（1）顯微鏡直接計數(shù)法
 ①原理：利用特定細菌計數(shù)板或血細胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物數(shù)量；②方法：用計數(shù)板計數(shù)； ③缺點：不能區(qū)分死菌與活菌．
（2）間接計數(shù)法（活菌計數(shù)法）
 ①原理：當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌．通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌．
②操作
a、設置重復組，增強實驗的說服力與準確性．
b、為了保證結果準確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進行計數(shù)．
③計算公式：每克樣品中的菌株數(shù)=（c÷V）×M，其中c代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積（mL），M代表稀釋倍數(shù)．

解答 解：（1）土壤中含有分解石油的多種微生物，向多孔結構的污染土壤中通入空氣，可使微生物的代謝（或有氧呼吸）增強，同時由于石油主要含有碳和氫，因此還需加入適量含氮和磷元素的物質促進微生物的生長繁殖，進而加快石油污染物的降解．
（2）要得到能夠分解石油的單一假單胞菌（細菌的一種），應該用以石油為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基；純化菌株常用平板劃線法或稀釋涂布平板法．
（3）實際操作中通常選用一定稀釋范圍的土壤樣品液進行培養(yǎng)，目的是保證獲得菌落數(shù)為30-300的平板進行計數(shù)；由于兩個或多個細菌細胞連在一起時，平板上只能觀察到一個菌落，因此采用稀釋涂布平板法計數(shù)的結果偏�。�
故答案為：
（1）代謝（或有氧呼吸）         氮和磷
（2）石油      平板劃線法     稀釋涂布平板
（3）30-300＜兩個或多個細菌細胞連在一起時，平板上只能觀察到一個菌落

點評 本題考查微生物的分離和培養(yǎng)，要求考生識記培養(yǎng)基的種類、成分及功能；識記接種微生物常用的兩種方法；識記計數(shù)微生物的方法及注意事項，能結合所學的知識準確答題．