Question

【題目】如圖是利用β﹣乳球蛋白（BLG）基因5′端調(diào)控序列和人乳鐵蛋白（hLF）基因構(gòu)建能在羊乳腺細(xì)胞特異性表達(dá)的運(yùn)載體的簡要流程圖，請據(jù)圖回答下列問題：
（1）②為PCR過程，除了要加入引物、原料外還需要加入 ， 在此過程中引物的作用是 ．
（2）BamH I的識別序列為﹣G↓GATTC﹣，Hind III的識別序列為﹣A↓AGCTT﹣，選用這兩種酶進(jìn)行操作的意義是 ， 除此之外，③過程還需要酶．
（3）BLG基因5′端調(diào)控序列能使hLF基因在羊的乳腺細(xì)胞中特異性表達(dá)，這是因?yàn)?/span> ．
（4）要獲得能表達(dá)目的基因的羊，應(yīng)將重組質(zhì)粒導(dǎo)入羊的（填“乳腺細(xì)胞”或“去核卵細(xì)胞”、“受精卵”），獲得優(yōu)良胚胎后，為了提高胚胎的利用率，常采用的方法來處理胚胎．

Answer 1

【答案】
（1）耐高溫的DNA聚合酶、模板；使DNA聚合酶能夠從引物的3′端開始連接脫氧核苷酸
（2）避免目的基因和運(yùn)載體產(chǎn)生的末端任意連接（環(huán)化連接）； DNA連接
（3）BLG基因5′端調(diào)控序列作為啟動子,是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位,能驅(qū)動hLF基因轉(zhuǎn)錄出mRNA
（4）受精卵；胚胎分割
【解析】解：（1）PCR技術(shù)的條件：模板DNA（目的基因）、四種脫氧核苷酸、一對引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶），其中引物的作用是使DNA聚合酶能夠從引物的3′端開始連接脫氧核苷酸．（2）BamH I的識別序列為﹣G↓GATTC﹣，Hind III的識別序列為﹣A↓AGCTT﹣，選用這兩種酶進(jìn)行操作時產(chǎn)生的黏性末端不同，這樣可以避免目的基因和運(yùn)載體產(chǎn)生的末端任意連接（環(huán)化連接）；③為基因表達(dá)在的構(gòu)建過程，該過程首先需要用限制酶切割含有目的基因的外源DNA和運(yùn)載體，其次還需要DNA連接酶將目的基因和運(yùn)載體連接形成重組DNA．（3）BLG基因5′端調(diào)控序列能使hLF基因在羊的乳腺細(xì)胞中特異性表達(dá)，這是因?yàn)锽LG基因5′端調(diào)控序列作為啟動子，是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，能驅(qū)動hLF基因轉(zhuǎn)錄出mRNA．（4）培育轉(zhuǎn)基因動物時，應(yīng)該以受精作為受體細(xì)胞，因?yàn)槭芫�卵的全能性最高，且具有促進(jìn)全能性表達(dá)的物質(zhì)；來自同一個胚胎的后代具有相同的遺傳物質(zhì)，因此為了提高胚胎的利用率，常采用胚胎分割的方法來處理胚胎．

所以答案是：（1）耐高溫的DNA聚合酶、模板 使DNA聚合酶能夠從引物的3′端開始連接脫氧核苷酸 （2）避免目的基因和運(yùn)載體產(chǎn)生的末端任意連接（環(huán)化連接） DNA連接（3）BLG基因5′端調(diào)控序列作為啟動子，是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，能驅(qū)動hLF基因轉(zhuǎn)錄出mRNA （4）受精卵 胚胎分割

【考點(diǎn)精析】利用基因工程的原理及技術(shù)對題目進(jìn)行判斷即可得到答案，需要熟知基因工程的原理是利用DNA重組技術(shù)．