Question

科學(xué)家將魚抗凍蛋白基因轉(zhuǎn)入番茄，使番茄細(xì)胞的耐寒能力大大提高，可以在相對(duì)寒冷的環(huán)境中生長(zhǎng)。質(zhì)粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四種限制酶切割位點(diǎn)，下圖是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過程的示意圖(amp^r為抗氨芐青霉素基因)，其中①～④是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過程中的相關(guān)步驟，Ⅰ、Ⅱ表示相關(guān)結(jié)構(gòu)或細(xì)胞。請(qǐng)據(jù)圖回答問題。

(1)在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，可用一種或者多種限制酶進(jìn)行切割。為了避免目的基因和載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，在此實(shí)例中，應(yīng)該選用___________, __________限制酶，分別對(duì)_______________, ______________進(jìn)行切割。

(2)培養(yǎng)基中的氨芐青霉素會(huì)抑制番茄愈傷組織細(xì)胞的生長(zhǎng)，要利用該培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入魚抗凍蛋白基因的番茄細(xì)胞，應(yīng)使基因表達(dá)載體中含有________________________，作為標(biāo)記基因。

(3)研究人員通常采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將魚抗凍蛋白基因?qū)�入番茄�?xì)胞內(nèi)。通常采用______________________技術(shù)，在分子水平檢測(cè)目的基因是否翻譯形成了相應(yīng)的蛋白質(zhì)。

(4)利用組織培養(yǎng)技術(shù)將導(dǎo)入魚抗凍蛋白基因的番茄組織細(xì)胞培育成植株。圖中③、④依次表示組織培養(yǎng)過程中番茄組織細(xì)胞的____________, ______________過程。

 

Answer 1

【答案】

8分   

(1)含PstⅠ     SmaⅠ　 魚抗凍蛋白基因的DNA、  質(zhì)粒

(2)抗氨芐青霉素基因(amp^r)　

(3)抗原—抗體雜交

(4)脫分化、  再分化

【解析】

試題分析：

(1)在此實(shí)例中，應(yīng)該選用PstⅠ, SmaⅠ限制酶，分別對(duì)魚抗凍蛋白基因的DNA, 質(zhì)粒進(jìn)行切割。切割下來(lái)的魚抗凍蛋白基因左側(cè)是SmaI的切口，右側(cè)是PstI的切口，粘性末端不同，這樣切出的目的基因（魚抗凍蛋白基因）不會(huì)發(fā)生自生環(huán)化現(xiàn)象，質(zhì)粒的處理同上。

(2)培養(yǎng)基中的氨芐青霉素會(huì)抑制番茄愈傷組織細(xì)胞的生長(zhǎng)，要利用該培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入魚抗凍蛋白基因的番茄細(xì)胞，應(yīng)使基因表達(dá)載體中含有抗氨芐青霉素基因(amp^r)，作為標(biāo)記基因。

(3)通常采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將魚抗凍蛋白基因?qū)�入番茄�?xì)胞內(nèi),采用抗原—抗體雜交技術(shù)，在分子水平檢測(cè)目的基因是否翻譯形成了相應(yīng)的蛋白質(zhì)。

(4)利用組織培養(yǎng)技術(shù)將導(dǎo)入魚抗凍蛋白基因的番茄組織細(xì)胞培育成植株,體現(xiàn)植物細(xì)胞的全能性。圖中③、④依次表示脫分化、再分化。

考點(diǎn)：基因工程。

點(diǎn)評(píng)：本題相對(duì)綜合，可以通過理解記憶的方法平時(shí)加以訓(xùn)練。