Question

如圖圖一是利用基因工程生產(chǎn)人胰島素的主要流程圖，圖二是生產(chǎn)過程中所制備的帶有目的基因供體DNA分子及運載體（質(zhì)粒）的示意圖．箭頭所指為相應(yīng)限制性核酸內(nèi)切酶的識別位點，Tet^r表示四環(huán)素抗性基因，Tet^r上游有基因C，基因C的表達(dá)產(chǎn)物會阻斷Tet^r基因的表達(dá)．請回答下列問題：

（1）第②步中需要的酶是

 

，第④步常用的方法是

 

．
（2）若圖一所示的過程中以Tet^r為標(biāo)記基因，則第③中應(yīng)選用

 

對

 

進(jìn)行切割，再用DNA連接酶連接，連接的化學(xué)鍵是

 

．為檢測轉(zhuǎn)化結(jié)果，將經(jīng)第④步處理后的土壤農(nóng)桿菌培養(yǎng)液接種在含有

 

培養(yǎng)基上，長出的菌落就是成功插入目的基因的菌落．
（3）第⑥步中經(jīng)脫分化形成的愈傷組織細(xì)胞的特點是

 

，檢驗?zāi)康幕�因在煙草�?xì)胞中是否成功表達(dá)的方法為

 

．

Answer 1

考點：基因工程的應(yīng)用

專題：

分析：1、圖一是利用基因工程生產(chǎn)人胰島素過程，①過程獲取的單鏈核酸是RNA，②是逆轉(zhuǎn)錄獲得DNA過程，③是基因表達(dá)載體的構(gòu)建，④是利用Ca²⁺轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)�入農(nóng)桿菌，⑤是將農(nóng)桿菌侵染煙草細(xì)胞，⑥是植物組織培養(yǎng)獲得轉(zhuǎn)基因植株．
2、圖二中基因C有兩個切割位點Bg1Ⅰ、HindⅢ，人胰島素基因兩端也有Bg1Ⅰ、HindⅢ切割位點，可用Bg1Ⅰ、HindⅢ兩種酶獲取目的基因．如選用SmaⅠ切割則不能破壞基因C的作用．

解答： 解：（1）逆轉(zhuǎn)錄過程獲得DNA需要逆轉(zhuǎn)錄酶和DNA聚合酶，將目的基因?qū)�入�?xì)菌的方法是鈣離子轉(zhuǎn)化法．
（2）由于基因C的表達(dá)產(chǎn)物會阻斷Tet^r基因表達(dá)，所以需要破壞基因C但不能破壞Tet^r基因，所以選用Bg1Ⅰ、HindⅢ進(jìn)行切割．DNA連接酶連接的化學(xué)鍵是磷酸二酯鍵．標(biāo)記基因是四環(huán)素抗性基因，所以在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)農(nóng)桿菌．
（3）愈傷組織細(xì)胞的特點是具有分生能力的薄壁細(xì)胞，檢驗?zāi)康幕�因在煙草�?xì)胞中是否成功表達(dá)的方法是抗原-抗體雜交．
答案：（1）逆轉(zhuǎn)錄酶和DNA聚合酶   鈣離子轉(zhuǎn)化法 
（2）Bg1Ⅰ、HindⅢ人胰島素基因和質(zhì)粒   磷酸二酯鍵   四環(huán)素
（3）具有分生能力的薄壁細(xì)胞    抗原-抗體雜交

點評：本題考查基因工程，解題關(guān)鍵：①理解基因工程操作過程．②能理解題意“基因C”的作用和 基因表達(dá)載體的構(gòu)建方法．