Question

2．微載體是由天然葡聚糖等組成的顆粒，常用與貼壁生長的細胞培養(yǎng)，又叫做動物細胞圍住培養(yǎng)，與其相關(guān)的裝置和流程圖如下，請回答：

（1）微載體的直徑很小，其培養(yǎng)原理是將對細胞無害的顆粒-微載體加入到培養(yǎng)液中，細胞在其表面附著（固著）/貼壁生長，而且操作中需要通過攪動使微載體始終保持懸浮狀態(tài)，而讓細胞與培養(yǎng)液充分接觸，這樣細胞就可以在載體表面繁殖成單層（“單層”、“多層”）
（2）培養(yǎng)罐中培養(yǎng)細胞時，要注意保持適宜的溫度和pH，還需要提供細胞所需的營養(yǎng)、氣體環(huán)境等．為維持培養(yǎng)液的pH，應(yīng)在培養(yǎng)液中加入95%空氣和5%CO₂的混合氣體．圖3是某科研小組培養(yǎng)的細胞，由于培養(yǎng)用具滅菌不嚴格，結(jié)果出現(xiàn)曲線2的情況，為了避免這種情況通�？梢栽谂囵B(yǎng)液中加入抗生素，其作用是防止培養(yǎng)過程中的污染（防止雜菌污染）．
（3）在生產(chǎn)單克隆抗體的過程中，雜交瘤細胞在加入培養(yǎng)罐前，需篩選出符合條件的細胞群，還要對選出的雜交瘤細胞進行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測方能加入培養(yǎng)罐培養(yǎng)．
（4）科研人員利用明膠微載體培養(yǎng)出了胚胎干細胞，并在培養(yǎng)液中加入分化誘導(dǎo)因子，成功構(gòu)建了骨組織．
（5）在試管動物的培育中，涉及的關(guān)鍵技術(shù)是體外受精和早期胚胎的培養(yǎng)，再將一些胚胎進行移植，就可以實現(xiàn)良種動物的大量繁殖．移植中要求受體母牛要具有健康的體質(zhì)和正常繁殖的能力．

Answer 1

分析 1、動物細胞培養(yǎng)的流程：取動物組織塊（動物胚胎或幼齡動物的器官或組織）→剪碎→用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個細胞→制成細胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中進行原代培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細胞重新用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個細胞繼續(xù)傳代培養(yǎng)．
2、動物細胞培養(yǎng)需要滿足以下條件
①無菌、無毒的環(huán)境：培養(yǎng)液應(yīng)進行無菌處理．通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素，以防培養(yǎng)過程中的污染．此外，應(yīng)定期更換培養(yǎng)液，防止代謝產(chǎn)物積累對細胞自身造成危害．
②營養(yǎng)：合成培養(yǎng)基成分：糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等．通常需加入血清、血漿等天然成分．
③溫度：適宜溫度：哺乳動物多是36.5℃+0.5℃；pH：7.2～7.4．
④氣體環(huán)境：95%空氣+5%CO₂．O₂是細胞代謝所必需的，CO₂的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH．
3、單克隆抗體的制備過程：首先用特定抗原注射小鼠體內(nèi)，使其發(fā)生免疫，小鼠體內(nèi)產(chǎn)生具有免疫能力的B淋巴細胞．利用動物細胞融合技術(shù)將B淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合，在經(jīng)過兩次篩選：①篩選得到雜交瘤細胞（去掉未雜交的細胞以及自身融合的細胞）②篩選出能夠產(chǎn)生特異性抗體的細胞群．兩次抗體檢測：專一抗體檢驗陽性，獲得能產(chǎn)生特異性抗體、又能大量增殖雜交瘤細胞．最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中提取單克隆抗體．
4、試管動物技術(shù)是指通過人工操作使卵子和精子在體外條件下成熟和受精，并通過培養(yǎng)發(fā)育為早期胚胎后，再經(jīng)移植產(chǎn)生后代的技術(shù)．

解答 解：（1）在動物細胞培養(yǎng)過程中，細胞會出現(xiàn)貼壁細胞生長現(xiàn)象；到細胞表面相互接觸時，細胞會停止分裂增殖，會出現(xiàn)細胞的接觸抑制現(xiàn)象．將對細胞無害的顆粒-微載體加入到培養(yǎng)液中，細胞會附著在顆粒-微載體上生長，而且操作中需要通過攪動使微載體始終保持懸浮狀態(tài)，而讓細胞與培養(yǎng)液充分接觸，這樣細胞就可以在載體表面繁殖成單層．
（2）在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素，能防止培養(yǎng)過程中的污染；氣體環(huán)境主要是提供細胞所需的O₂和CO₂，其中CO₂的作用是維持培養(yǎng)液的pH．
（3）細胞融合是隨機的過程，所以需要用選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基篩選，目的是選擇出雜交瘤細胞．對篩選出的細胞還需進行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經(jīng)多次篩選，就可產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞．
（4）在ES細胞培養(yǎng)液中加入特定的促進分化的因子可以體外誘導(dǎo)定向形成骨組織．
（5）試管動物技術(shù)是指通過人工操作使卵子和精子在體外條件下成熟和受精，并通過培養(yǎng)發(fā)育為早期胚胎后，再經(jīng)移植產(chǎn)生后代的技術(shù)．胚胎移植中要求受體母牛要具有健康的體質(zhì)和正常繁殖的能力．
故答案為：
（1）附著（固著）/貼壁       單層
（2）5%CO₂                    防止培養(yǎng)過程中的污染（防止雜菌污染）
（3）抗體檢測          
（4）分化誘導(dǎo)
（5）早期胚胎          正常繁殖

點評 本題綜合考查細胞工程和胚胎工程的相關(guān)知識，要求考生識記單克隆抗體制備的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節(jié)；識記動物細胞培養(yǎng)的具體過程；識記胚胎移植的基本程序，能結(jié)合所學的知識準確答題．