Question

1．如圖是將人的生長激素基因導入細菌B細胞內制造“工程菌”示意圖，所用載體為質粒A．已知細菌B細胞內不含質粒A，也不含質粒A上的基因，質粒A導入細菌B后，其上的基因能否得到表達的探究：
（1）將目的基因和質粒相結合形成重組質粒（重組DNA分子）需要的工具為：限制酶和DNA連接酶．

（2）目前把重組質粒導入細菌細胞時，效率還不高；導入完成后得到的細菌，實際上有的根本沒有導入質粒，有的導入的是普通質粒A，只有少數(shù)導入的是重組質粒．此處可以通過如下步驟來鑒別得到的細菌是否導入了質粒A或重組質粒：將得到的細菌涂抹在一個含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上，能夠生長的就是導入質粒A或重組質粒的，反之則沒有．使用這種方法鑒別的原因是普通質粒A和重組質粒都含有抗氨芐青霉素基因．
（3）若把通過鑒定證明導入了普通質粒A或重組質粒的細菌放在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，會發(fā)生的現(xiàn)象：有的能生長；有的不能生長．導入普通質粒A的細菌能（能或不能）生長，因為因普通質粒A上有抗四環(huán)素基因；導入重組質粒的細菌不能（能或不能）生長，因為因為目的基因插在抗四環(huán)素基因中，使其結構被破壞．
（4）導入細菌B細胞中的目的基因成功表達的標志是人的生長激素，受體細胞通過轉錄和翻譯過程形成這種蛋白質．

Answer 1

分析 根據(jù)題意和圖示分析可知：圖示表示將人的生長激素基因導入細菌B細胞內制造“工程菌”的過程．質粒A上含有四環(huán)素抗性基因和氨芐青霉素抗性基因，構建基因表達載體后，破環(huán)了質粒A的四環(huán)素抗性基因，但氨芐青霉素抗性基因正常，所以導入重組質粒或普通質粒的大腸桿菌都能抗氨芐青霉素，但導入重組質粒的大腸桿菌不能抗四環(huán)素．

解答 解：（1）將目的基因和質粒相結合形成重組質粒（重組DNA分子）：①用一定的限制酶切割質粒，使其出現(xiàn)一個有黏性未端的切口；②用同種限制酶切割目的基因，產生相同的黏性未端；③將切下的目的基因片段插入質粒的切口處再加入適量的DNA連接酶，使質粒與目的基因結合成重組質粒．
（2）將得到的細菌涂布在一個含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上，能夠生長的就是導入了普通質粒A或重組質粒，反之則沒有．使用這種方法鑒別的原因是普通質粒和重組質粒均含有抗氨芐青霉素基因，其表達產物能分解青霉素．
（3）若把通過鑒定證明導入普通質粒A或重組質粒的細菌放在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，由于普通質粒上有抗四環(huán)素基因，重組質粒上的該基因由于目的基因的插入而被破壞，因此培養(yǎng)基中的細菌有的能生長，有的不能生長．
（4）基因成功表達的標志是受體細胞通過轉錄和翻譯過程合成出相應的蛋白質，即人的生長激素．
故答案為：
（1）限制酶和DNA連接酶
（2）普通質粒A和重組質粒都含有抗氨芐青霉素基因
（3）能   因普通質粒A上有抗四環(huán)素基因；不能．因為目的基因插在抗四環(huán)素基因中，使其結構被破壞
（4）人的生長激素

點評 本題結合“工程菌”的制造過程，考查基因工程的應用，要求考生識記基因工程的基本操作步驟，能分析題圖，明確目的基因插入質粒后會破壞質粒的四環(huán)素抗性基因，再對選項作出準確的判斷，屬于考綱識記和理解層次的考查．