Question

【題目】超氧化物歧化酶(SOD)是生物體內(nèi)重要的抗氧化酶，具有延緩衰老的功效。科研人員采用農(nóng)桿菌介導轉(zhuǎn)入法將攜帶SOD基因的Ti質(zhì)粒導人胡蘿卜細胞中，成功培育出SOD基因的胡蘿卜新品種。回客下列問題:

（1）Ti質(zhì)粒是基因工程中常用的載體之一，作為運載體必須具備的條件________（至少答兩點）

（2）________________________________是基因工程的核心步驟，在該步操作中需要將SOD基因與Ti質(zhì)粒的_________________區(qū)段結合。需要用________________________酶，并且將SOD基因置于_____________和______________之間。最終是否整合到胡蘿卜的某染色體上,可用可用________________________方法來鑒定，或直接測定該染色體的DNA序列

Answer 1

【答案】能自我復制基因表達載體的構建；有一個至多個限制酶切割位點；有特殊的標記基因 基因表達載體的構建 T-DNA 限制酶和DNA連接酶 啟動子 終止子 DNA 分子雜交

【解析】

1、質(zhì)粒是一種裸露的、結構簡單、獨立于細菌擬核DNA之外并具有自我復制能力的雙鏈環(huán)狀DNA分子。

2、作為運載體必須具備的條件：①要具有限制酶的切割位點；②要有標記基因(如抗性基因),以便于重組后重組子的篩選③能在宿主細胞中穩(wěn)定存在并復制；④是安全的，對受體細胞無害，而且要易從供體細胞分離出來。

3、基因工程的步驟：①獲取目的基因（從基因組文庫中獲取或、利用PCR技術擴增目的基因）②基因表達載體的構建（這也是基因工程的核心）③將目的基因?qū)�入受體細胞（植物、動物、微生物）④目的基因的檢測與鑒定 （DNA分子雜交技術,分子雜交技術、抗原抗體雜交）。

(1)質(zhì)粒作為運載體必須具備的條件：①要具有限制酶的切割位點；②要有標記基因(如抗性基因),以便于重組后重組子的篩選③能在宿主細胞中穩(wěn)定存在并復制；④是安全的，對受體細胞無害，而且要易從供體細胞分離出來。

(2)基因工程的核心步驟是基因表達載體的構建, 在該步操作中需要將SOD基因與Ti質(zhì)粒的T-DNA區(qū)段結合。目的基因與運載體結合用到了限制酶和DNA連接酶�；�因表達載體的構建是使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳至下一代使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用，一個基因表達載體的組成是目的基因+啟動子+終止子+標記基因。檢測轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA分子雜交技術。