Question

【題目】凝膠色譜技術(shù)是二十世紀(jì)六十年代初發(fā)展起來的一種快速而又簡單的分離技術(shù)，由于設(shè)備簡單、操作方便，不需要有機(jī)溶劑，對高分子物質(zhì)有很高的分離效果，目前已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于多個(gè)領(lǐng)域，請回答有關(guān)問題。

（1）若選用 Sephadex G-100，則G表示_____________________________________________________。

（2）通過凝膠色譜法可將從紅細(xì)胞中分離出的血紅蛋白樣品進(jìn)一步______________________，在血紅蛋白的提取和分離實(shí)驗(yàn)中有以下操作，試回答：

①實(shí)驗(yàn)時(shí)要對采集到的血液中的紅細(xì)胞進(jìn)行洗滌，洗滌的目的是______________________________________________________________。

②在______________作用下，紅細(xì)胞會破裂釋放出血紅蛋白。

③將釋放出的血紅蛋白收集到透析袋中透析，這是樣品的_________________，而透析的目的是_____________________________________________。

④實(shí)驗(yàn)最后經(jīng)過SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行_____________________________。

（3）裝填凝膠色譜柱時(shí)，要注意色譜柱內(nèi)不能有氣泡存在，一旦發(fā)現(xiàn)氣泡必須重裝。這是因?yàn)?/span>_____________________________________________________。

Answer 1

【答案】凝膠的交聯(lián)程度、膨脹程度及分離范圍 純化 去除血漿蛋白 蒸餾水和甲苯 粗分離 去除相對分子質(zhì)量較小的雜質(zhì) 純度鑒定 氣泡會攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果

【解析】

凝膠色譜法也稱做分配色譜法，是根據(jù)相對分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)的有效方法。所用的凝膠實(shí)際上是一些微小的多孔球體，在小球體內(nèi)部有許多貫穿的通道，當(dāng)相對分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)通過凝膠時(shí)，相對分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程較長，移動速度較慢；而相對分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)無法進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，只能在凝膠外部移動，路程較短，移動速度較快。

（1）若選用SephadexG—100，則G表示凝膠的交聯(lián)程度、膨脹程度及分離范圍，100表示凝膠得水值，即每克凝膠膨脹時(shí)可吸水10克。

（2）通過凝膠色譜法可將從紅細(xì)胞中分離出的血紅蛋白樣品進(jìn)一步純化。

①實(shí)驗(yàn)時(shí)為了去除血漿蛋白，要用0.9%的生理鹽水對采集到的血液中的紅細(xì)胞進(jìn)行洗滌。

②在蒸餾水和甲苯的作用下，紅細(xì)胞會破裂釋放出血紅蛋白。

③將釋放出的血紅蛋白收集到透析袋中透析，這是樣品的粗分離，而透折的目的是去除相對分子質(zhì)量較小的雜質(zhì)。

④驗(yàn)最后經(jīng)過SDS——聚內(nèi)烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行純度鑒定。

（3）由于氣泡會攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果，因此裝填凝膠色譜柱時(shí)，要注意色譜柱內(nèi)不能有氣泡存在，一旦發(fā)現(xiàn)氣泡必須重裝。