Question

【題目】植物基因工程中，往往用光誘導型啟動子(PrbcS)使目的基因表達，其結合T基因后能使目的基因更高水平表達。下圖中①和②都為基因表達載體構建過程中的中間載體，請分析重組載體的部分構建過程并回答下列問題：

注：Ampr/Kmr分別為氨芐青霉素/卡那霉素抗性基因。origin為復制原點，其余為限制酶切位點。

(1) 對雙子葉植物進行基因工程改造最常用的方法是____________，還需結合____________技術才能獲得新性狀的植株。

(2) 中間載體通常用________法導入微生物中擴增，含有中間載體②PrbcS*T的微生物與含有中間載體①PrbcS*T的微生物相比，區(qū)別兩者差別的方法是____________________________。

(3) 經酶切后凝膠電泳，測得2B片段為0.4kb，經圖示信息分析，Prbcs*T的長度約為________。寫出中間載體②Prbcs*T圖中問號處限制酶的酶切位點：________________________。

(4) 如何在T基因前“點突變引入NcoⅠ”酶切位點？ ___________________。

Answer 1

【答案】農桿菌轉化法 植物組織培養(yǎng)技術 感受態(tài)細胞法 含有中間載體②PrbcS*T的微生物能在含有卡那霉素的培養(yǎng)基中生長，而不能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基中生長(或含有中間載體①PrbcS*T的微生物能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基中生長，而不能在含有卡那霉素的培養(yǎng)基中生長) 1.7 kb SphⅠ、BamHⅠ、EcoRⅠ、NotⅠ、XhoⅠ、EcoRⅤ 設計包含NcoⅠ識別序列的引物，然后用PCR技術擴增

【解析】

基因工程中目的基因導入的受體細胞不同，選用的方法不同，一般導入雙子葉植物常用農桿菌轉化法，導入動物細胞常用顯微注射法，導入微生物常用感受態(tài)法。運載體上常含有標記基因，可用來篩選目的基因是否導入受體細胞。

（1）將目的基因導入雙子葉植物常利用農桿菌轉化法。要想獲得轉基因植物，還需要對導入目的基因的受體細胞進行植物組織培養(yǎng)。

（2）將中間載體導入微生物時常先用鈣離子處理微生物使其成為感受態(tài)，易于吸收中間載體，該種方法為感受態(tài)細胞法。由圖可知，中間載體②上含卡那霉素抗性基因，而不含氨芐青霉素抗性基因，故含有中間載體②PrbcS*T的微生物能在含有卡那霉素的培養(yǎng)基中生長，而不能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基中生長。

（3）由圖可知，中間載體②的長度為2.7kb，經酶切后凝膠電泳，測得2B片段為0.4kb，設Prbcs*T的長度為y，則2.7-0.4+y=4kb，解得y=1.7kb。根據圖示中中間載體①PrbcS*T右側的酶切位點和中間載體②-2B右側的酶切位點可知，中間載體②Prbcs*T圖中問號處限制酶的酶切位點可為SphⅠ、BamHⅠ、EcoRⅠ、NotⅠ、XhoⅠ、EcoRⅤ的酶切位點。

（4）可設計包含NcoⅠ識別序列的引物，然后用PCR技術擴增，即可在T基因前“點突變引入NcoⅠ”酶切位點。