Question

毛角蛋白Ⅱ型中間絲（KIFⅡ）基因與絨山羊的羊絨質(zhì)量密切相關(guān)．獲得轉(zhuǎn)KIFⅡ基因的高絨質(zhì)絨山羊的簡(jiǎn)單流程如圖，認(rèn)真看圖后回答問(wèn)題．

（1）過(guò)程①中最常用的運(yùn)載工具是質(zhì)粒，此外，噬菌體的衍生物和

 

也可以做運(yùn)載體，人工合成的KIFⅡ基因基因可通過(guò)

 

技術(shù)手段體外迅速擴(kuò)增．
（2）要將重組質(zhì)粒導(dǎo)入羊胎兒成纖維細(xì)胞的方法是

 

，重組質(zhì)粒導(dǎo)入之后，可通過(guò)

 

技術(shù)，來(lái)檢測(cè)KIFⅡ基因是否已重組到羊胎兒成纖維細(xì)胞的染色體DNA上．
（3）在過(guò)程②中，從羊的胚胎中取胎兒成纖維細(xì)胞，用

 

處理，然后進(jìn)行分散培養(yǎng)．培養(yǎng)時(shí)，將培養(yǎng)瓶置于含

 

（要求寫清楚每種氣體所占比例）的混合氣體培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)液的配方通常含有葡萄糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、維生素等，一般還應(yīng)添加

 

．當(dāng)貼壁的成纖維細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到細(xì)胞表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞會(huì)停止生長(zhǎng)，這種現(xiàn)象成為細(xì)胞的

 

．
（4）在過(guò)程③中，用

 

處理以獲取更多的卵（母）細(xì)胞．卵（母）細(xì)胞應(yīng)培養(yǎng)
到

 

期．成熟卵（母）細(xì)胞在核移植前需要進(jìn)行

 

處理．然后與成纖維細(xì)胞通過(guò)電刺激后融合，形成重組細(xì)胞．再利用物理或化學(xué)方法刺激，使之完成細(xì)胞分裂和發(fā)育，在體外培養(yǎng)成重組早期胚胎．
（5）從重組細(xì)胞到早期胚胎過(guò)程中所用的胚胎工程技術(shù)是

 

．將早期胚胎通過(guò)胚胎移植技術(shù)移入代孕母羊．早期胚胎在

 

期開(kāi)始出現(xiàn)分化．胚胎移植前可通過(guò)

 

技術(shù)可獲得較多胚胎．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù),動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)過(guò)程,胚胎分割移植

專題：

分析：分析題圖：圖示表示獲得轉(zhuǎn)KIFⅡ基因的高絨質(zhì)絨山羊的簡(jiǎn)單流程圖，其中①表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程，該過(guò)程需要限制酶、DNA連接酶和運(yùn)載體；②表示動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程，該過(guò)程需要采用胰蛋白酶處理組織塊以獲得單個(gè)細(xì)胞；③表示卵母細(xì)胞的采集和培養(yǎng)過(guò)程．

解答： 解：（1）過(guò)程①表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程，常用的運(yùn)載工具是質(zhì)粒、噬菌體的衍生物和動(dòng)植物病毒，人工合成的KIFⅡ基因基因可通過(guò) PCR技術(shù)手段體外迅速擴(kuò)增．
（2）將重組質(zhì)粒導(dǎo)入羊胎兒成纖維細(xì)胞的方法是顯微注射法；重組質(zhì)粒導(dǎo)入之后，可通過(guò)DNA分子雜交技術(shù)，來(lái)檢測(cè)KIFⅡ基因是否已重組到羊胎兒成纖維細(xì)胞的染色體DNA上．
（3）過(guò)程②表示動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)，從羊的胚胎中取胎兒成纖維細(xì)胞，用胰蛋白酶和膠原蛋白酶處理形成單個(gè)細(xì)胞．培養(yǎng)時(shí)，將培養(yǎng)瓶置于含95%的空氣（維持細(xì)胞代謝）和5%CO2（維持培養(yǎng)基（液）的pH）的混合氣體培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)液的配方通常含有葡萄糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、維生素等，一般還應(yīng)添加動(dòng)物血清．當(dāng)貼壁的成纖維細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到細(xì)胞表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞會(huì)停止生長(zhǎng)，這種現(xiàn)象成為細(xì)胞的接觸抑制．
（4）過(guò)程③表示卵母細(xì)胞的采集和培養(yǎng)，要得到更多的卵（母）細(xì)胞需用促性腺激素對(duì)動(dòng)物進(jìn)行超數(shù)排卵處理，應(yīng)培養(yǎng)到減數(shù)第二次分裂中期期；成熟卵（母）細(xì)胞在核移植前需要進(jìn)行去核處理，以保證克隆后代的遺傳性狀主要來(lái)自于供體核．
（5）從重組細(xì)胞到早期胚胎需要才用早期胚胎培養(yǎng)技術(shù)；早期胚胎在囊胚期開(kāi)始出現(xiàn)分化．在胚胎移植時(shí)，可通過(guò)胚胎分割技術(shù)獲得更多的胚胎．
故答案為：
（1）動(dòng)植物病毒   PCR
（2）顯微注射法   DNA分子雜交
（3）胰蛋白酶     95%的空氣和5%CO2    動(dòng)物血清   接觸抑制
（4）促性腺激素     減數(shù)第二次分裂中期     去核
（5）早期胚胎培養(yǎng)   囊胚期    胚胎分割

點(diǎn)評(píng)：本題結(jié)合轉(zhuǎn)基因山羊培育過(guò)程圖，考查基因工程、細(xì)胞工程和胚胎工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記所列知識(shí)要點(diǎn)，能準(zhǔn)確判斷圖中各過(guò)程的名稱，并能在較簡(jiǎn)單的情境中使用，屬于考綱識(shí)記層次的考查．