Question

一種重癥聯(lián)合免疫缺陷病（簡(jiǎn)稱(chēng)SCID），這種患者缺乏正常的人體免疫功能，只要稍被細(xì)菌或病毒感染，就會(huì)發(fā)病死亡．經(jīng)研究證實(shí)，SCID病人細(xì)胞的一個(gè)常染色體上編碼腺苷酸脫氨酶（簡(jiǎn)稱(chēng)ADA）的基因ada發(fā)生了突變．目前，人們已經(jīng)找到了治療該疾病的方案．如圖：
（1）此圖過(guò)程中用到的運(yùn)載體是

 

．
（2）運(yùn)載體必須具備的條件是

 

（多選）
A．能在宿主細(xì)胞中復(fù)制并保存  
B．具有多個(gè)限制酶切點(diǎn)，以便與外源基因連接
C．具有標(biāo)記基因，便于進(jìn)行篩選       
D．是環(huán)狀形態(tài)的DNA分子
（3）檢測(cè)ADA基因在血細(xì)胞中是否轉(zhuǎn)錄的方法是

 

．
（4）血細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中要選擇

 

代以內(nèi)的細(xì)胞，以保持

 

．
（5）圖中的治療方法是

 

（體內(nèi)或體外）基因治療法．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù),動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)過(guò)程

專(zhuān)題：

分析：作為運(yùn)載體必須具備的條件：①要具有一個(gè)或多個(gè)限制酶的切割位點(diǎn)；②要有標(biāo)記基因（如抗性基因），以便于重組后重組子的篩選；③能在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定存在并復(fù)制；④是安全的，對(duì)受體細(xì)胞無(wú)害，而且要易從供體細(xì)胞分離出來(lái)．

解答： 解：（1）分析圖解可知，圖中將ADA基因整合到逆轉(zhuǎn)錄病毒的核酸中，因此該過(guò)程中用到的運(yùn)載體是逆轉(zhuǎn)錄病毒．
（2）作為運(yùn)載體必須具備的條件：①能在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定存在并復(fù)制；②要具有一個(gè)或多個(gè)限制酶的切割位點(diǎn)；③要有標(biāo)記基因（如抗性基因），以便于重組后重組子的篩選；④是安全的，對(duì)受體細(xì)胞無(wú)害，而且要易從供體細(xì)胞分離出來(lái)．故選ABC．
（3）檢測(cè)ADA基因在血細(xì)胞中是否轉(zhuǎn)錄的方法是分子雜交技術(shù)．
（4）原代培養(yǎng)細(xì)胞傳至10代左右就不容易傳下去，細(xì)胞生長(zhǎng)停滯，大部分細(xì)胞衰老死亡，少數(shù)細(xì)胞能存活傳到40～50代．因此血細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中要選擇10代以內(nèi)的細(xì)胞，以保持正常的二倍體核型，保證供體細(xì)胞正常的遺傳基礎(chǔ)．
（5）圖中的治療方法是體外基因治療法．
故答案為：
（1）逆轉(zhuǎn)錄病毒
（2）ABC
（3）分子雜交技術(shù)
（4）10    正常的二倍體核型，保證供體細(xì)胞正常的遺傳基礎(chǔ)
（5）體外

點(diǎn)評(píng)：本題以體外基因治療的流程圖為載體，考查了基因工程和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的有關(guān)知識(shí)，要求考生能夠識(shí)記基因工程的操作工具以及操作步驟；掌握目的基因檢測(cè)與鑒定的方法等，難度適中．