Question

（10分）生物技術(shù)實(shí)踐

   材料：飼料原料中的磷元素有相當(dāng)一部分存在于植酸中，豬、禽等動(dòng)物由于缺乏有關(guān)酶，無法有效利用植酸，造成磷源浪費(fèi)，而且植酸隨糞便排除后易造成環(huán)境有機(jī)磷污染。植酸酶能催化植酸水解成肌醇和磷酸，因此成為目前重要的飼料添加劑之一。

（1）商品化植酸酶主要來自微生物。在產(chǎn)酶菌株篩選過程中，常在基本培養(yǎng)基中添加不溶于水的植酸鈣制成固體平板，植酸鈣被植酸酶分解后可在平板上產(chǎn)生                 ，可根據(jù)其大小選擇目的菌株，所得菌株需要進(jìn)一步測(cè)定植酸酶活性。活性測(cè)定可以植酸鈉作為底物，活性可用一定條件下單位時(shí)間                          表示。

（2）利用上述所得菌株制備植酸酶的流程如下圖：

Ⅰ中的主要成分為          ；Ⅱ中包含多種酸酶等多種蛋白質(zhì)。請(qǐng)寫出一種純化得到植酸酶的方法及其依據(jù)。

（3）為建設(shè)基因工程菌，可用PCR等技術(shù)從上述菌株中克隆植酸酶基因。PCR反應(yīng)包含多次循環(huán)，每次循環(huán)包括三步：____       。反應(yīng)過程中打開模板DNA雙鏈的方法是        。

（4）除植酸酶外，微生物還應(yīng)用在                  的生產(chǎn)中。

Answer 1

（1）透明圈     植酸鈉的消耗量（肌醇和磷酸的生成量）

（2）小分子雜質(zhì)   

凝膠色譜法：根據(jù)蛋白質(zhì)之間分子大小，吸附性質(zhì)等差異進(jìn)行純化。（或電泳法：根據(jù)蛋白質(zhì)之間電荷，分子大小等差異進(jìn)行純化。）

（3）變性，復(fù)性，和延伸      加熱

（4）蛋白酶，脂肪酶，纖維素酶

解析:

本題考查對(duì)微生物的分離和培養(yǎng)，蛋白質(zhì)的純化，酶活性鑒定等知識(shí)，結(jié)合實(shí)際應(yīng)用。