Question

9．生物興趣小組試圖為探究牛和山羊的瘤胃中的微生物對尿素是否有分解作用，設(shè)計(jì)了以下實(shí)驗(yàn)，并成功篩選到能降解尿素的細(xì)菌（目的菌）．培養(yǎng)基成分如表所示，實(shí)驗(yàn)步驟如圖所示．請分析回答問題：

KH2PO4	1.4g
Na2HPO4	2.1g
MgSO4•7H2O	0.2g
葡萄糖	10g
尿素	1g
瓊脂	15g
溶解后自來水定容到1000mL

（1）在實(shí)驗(yàn)過程中：①培養(yǎng)基  ②培養(yǎng)皿  ③玻棒、試管、錐形瓶、吸管  ④瘤胃中液體．其中需要滅菌是①②③（填序號）．
（2）分離分解尿素的細(xì)菌實(shí)驗(yàn)時(shí)，甲同學(xué)從培養(yǎng)基上篩選出大約150個(gè)菌落，而其他同學(xué)只選擇出大約50個(gè)菌落．甲同學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果差異的原因可能有①②③（填序號）①取樣不同 ②培養(yǎng)基污染 ③操作失誤 ④沒有設(shè)置對照
（3）以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基培養(yǎng)“目的菌”后，加入酚紅指示劑后變紅色，說明“目的菌”能分解尿素．
（4）比較細(xì)菌與酵母菌的結(jié)構(gòu)最明顯的區(qū)別是；細(xì)菌沒有以核膜為界的成形的細(xì)胞核．從同化作用類型來看的，篩選出來的“目的菌”屬于異養(yǎng)型生物．
（5）為進(jìn)一步確定取自瘤胃中液體的適當(dāng)稀釋倍數(shù)，用稀釋涂布平板法接種，然后將接種的培養(yǎng)皿放置在37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h～48h，觀察并統(tǒng)計(jì)具有紅色環(huán)帶的菌落數(shù)，結(jié)果如表，其中10⁶或10⁵倍的稀釋比較合適．

稀釋倍數(shù)	103	104	105	106	107
菌落數(shù)	＞500	367	248	36	18

Answer 1

分析 1、微生物常見的接種的方法
①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落．
2、選擇培養(yǎng)基是在培養(yǎng)基中加入相應(yīng)的特殊營養(yǎng)物質(zhì)或化學(xué)物質(zhì)，抑制不需要的微生物的生長，有利于所需微生物的生長．
3、消毒和滅菌

	消毒	滅菌
概念	使用較為溫和的物理或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物（不包芽孢和孢子）	使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所用的微生物（包括芽孢和孢子）
常用方法	煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學(xué)藥劑消毒法、紫外線消毒法	灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌
適用對象	操作空間、某些液體、雙手等	接種環(huán)、接種針、玻璃器皿、培養(yǎng)基等

解答 解：（1）在實(shí)驗(yàn)過程中：①培養(yǎng)基  ②培養(yǎng)皿  ③玻棒、試管、錐形瓶、吸管  ④瘤胃中液體．其中需要滅菌是①培養(yǎng)基  ②培養(yǎng)皿  ③玻棒、試管、錐形瓶、吸管．
（2）由題意知，該同學(xué)與其他同學(xué)獲得的菌落數(shù)差異很大，可能的原因是采用的土樣不同，培養(yǎng)基滅菌不徹底，培養(yǎng)基被污染；或者是實(shí)驗(yàn)過程中沒有進(jìn)行無菌操作．
（3）以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基培養(yǎng)“目的菌”后，加入酚紅指示劑后變紅色，說明“目的菌”能分解尿素．
（4）細(xì)菌屬于原核生物，酵母菌屬于真核生物，因此比較細(xì)菌與酵母菌的結(jié)構(gòu)最明顯的區(qū)別是：細(xì)菌沒有以核膜為界的成形的細(xì)胞核．從同化作用類型來看的，該菌屬于異養(yǎng)型，需加入葡萄糖等有機(jī)碳源．
（5）觀察并統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)應(yīng)選30-300之間的培養(yǎng)皿進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，故應(yīng)選10⁶或10⁵倍的稀釋比較合適．
故答案為：
（1）①②③
（2）①②③
（3）尿素“目的菌”能分解尿素
（4）沒有以核膜為界的成形的細(xì)胞核   異養(yǎng)型生物
（5）稀釋涂布平板    10⁶或10⁵

點(diǎn)評 本題是對用于微生物培養(yǎng)的培養(yǎng)基的配方及營養(yǎng)成分、選擇培養(yǎng)基的選擇作用、常用的接種方法、無菌操作技術(shù)、對分解尿素的菌的鑒定等相關(guān)知識的綜合性考查，回憶微生物培養(yǎng)的培養(yǎng)基的配方和營養(yǎng)成分、選擇培養(yǎng)基的選擇作、常用的接種方法的具體操作和目的，無菌操作技術(shù)、對分解尿素的菌的鑒然后結(jié)合問題進(jìn)行解答．