Question

野生型大腸桿菌（E．coli）具有完整的LacZ基因，該基因編碼的β-半乳糖苷酶由α片段和ω片段兩部分組成，兩部分均存在時(shí)可將無色化合物X-gal切割成半乳糖和深藍(lán)色的物質(zhì)5-溴-4-靛藍(lán)，從而使整個(gè)菌落變?yōu)樗{(lán)色。DH5α是基因工程中常用的一種大腸桿菌誘變菌株，對氨芐青霉素敏感，其LacZ基因中編碼ω片段的序列仍然保留，但編碼α片段的序列缺失。

（1）根據(jù)中心法則，LacZ基因控制β-半乳糖苷酶合成的過程主要包括_____和______兩個(gè)環(huán)節(jié)。

（2）某研究小組構(gòu)建了質(zhì)粒pXY-1，如圖甲所示，該質(zhì)粒含氨芐青霉素抗性基因Ampr和編碼大腸桿菌β-半

乳糖苷酶α片段的基因片段LacZ’。圖乙顯示的則是Nae I、Hpa II和Kas I三種限制性內(nèi)切酶的識別序

列（表示切割位點(diǎn)）。

若以該質(zhì)粒作為運(yùn)載體，將外源目的基因（圖丙）導(dǎo)入大腸桿菌DH5α菌株，在構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)應(yīng)選用的限制性內(nèi)切酶是______。此外，還需用到的另一種酶是______。

（3）若用涂布有氨芐青霉素和X-gal的固體培養(yǎng)基篩選上一題中含目的基因的受體菌，下列說法中正確的

有______。（多選）

A．沒有導(dǎo)入任何質(zhì)粒的DH5α細(xì)菌可以在該培養(yǎng)基上生長且菌落為白色

B．導(dǎo)入了pXY-1空載體質(zhì)粒的DH5α細(xì)菌可以在該培養(yǎng)基上生長且菌落為藍(lán)色

C．導(dǎo)入了pXY-1重組質(zhì)粒的DH5α細(xì)菌可以在該培養(yǎng)基上生長且菌落為白色

D．導(dǎo)入了pXY-1重組質(zhì)粒的DH5α細(xì)菌可以在該培養(yǎng)基上生長且菌落為藍(lán)色

（4）．現(xiàn)從上一題的固體培養(yǎng)基平板上挑取一個(gè)重組菌落，經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng)后提取質(zhì)粒，分別用不同的限制性內(nèi)

切酶處理并對酶切產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，結(jié)果如表所示：

所用限制性內(nèi)切酶	所得條帶長度
BamH I、Sca I雙酶切	1230bp、2770bp
Hpa II、Sca I雙酶切	460bp、1240bp、xbp

分別用不同的限制性內(nèi)

切酶處理并對酶切產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，結(jié)果如表所示：據(jù)此可知，目的基因全長為______bp，在其內(nèi)部存在______（填限制酶名稱）的切割位點(diǎn)，表中字母x代表的數(shù)值應(yīng)為______。

Answer 1