Question

4．人組織纖溶酶原激活物（htPA）是一種重要的藥用蛋白，可在轉htPA基因母羊的羊乳中獲得．流程如下：

（1）htPA基 因可以直接從人體細胞中獲取，并通過技術 大量擴增．htPA基因與載體用限制酶切割后，再通過DNA連接（酶）酶連接，以構建重組表達載體．檢測目的基因是否已插入受體細胞DNA，可采用DNA分子雜交（或核酸探針）技術．
（2）為獲取更多的卵（母）細 胞，要對供體母羊注射促性腺激素，使其超數(shù)排卵．若受精作用發(fā)生在體內，則有兩道屏障防止多精入卵，其中第一道屏障是透明帶反應．
（3）將重組表達載體導 入羊受精卵常用的方法是顯微注射法．為了獲得轉基因母羊，移植前需對已成功轉入目的基因的胚胎進行性別鑒定．對所獲得的胚胎進行胚胎分割可獲得多個轉基因個體．
（4）若在轉htPA基因母羊的羊乳中檢測到htPA（或人組織纖溶酶原激活物），說明目的基因成功表達．

Answer 1

分析 DNA重組技術至少需要三種工具：限制性核酸內切酶（限制酶）、DNA連接酶、運載體．
目的基因分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術．
該基因工程需要對羊的性別進行選擇，由于只有母羊能夠分泌乳汁，因此選擇母羊的胚胎進行移植．

解答 解：（1）htPA基因可以直接從人體細胞中獲取，并通過技術PCR大量擴增．htPA基因與載體用限制酶切割后，再通過DNA連接酶連接，以構建重組表達載體．檢測目的基因是否已插入受體細胞DNA，可采用DNA分子雜交（或核酸探針）技術．
（2）為獲取更多的卵（母）細胞，要對供體母羊注射促性腺激素，使其超數(shù)排卵．若受精作用發(fā)生在體內，則有兩道屏障防止多精入卵，其中第一道屏障是透明帶反應，第二道屏障為卵黃膜的封閉作用．
（3）將重組表達載體導入羊受精卵常用的方法是顯微注射法．為了獲得轉基因母羊，移植前需對已成功轉入目的基因的胚胎進行性別鑒定．對所獲得的胚胎進行胚胎分割可獲得多個轉基因個體．
（4）若在轉htPA基因母羊的羊乳中檢測到htPA（或人組織纖溶酶原激活物），說明目的基因成功表達．
故答案為：
（1）PCR       DNA連接（酶）  DNA分子雜交（或核酸探針）
（2）超數(shù)排卵   透明帶反應
（3）顯微注射法   性別鑒定    胚胎分割
（4）htPA（或人組織纖溶酶原激活物）

點評 本題考查了基因工程和胚胎工程的相關知識，要求考生能夠識記基因工程的操作步驟；明確該基因工程中需要選擇母羊進行胚胎移植；要求考生具有扎實的基礎知識，難度適中，屬于考綱中識記、理解層次的考查．