某質(zhì)粒上有SalI、Hindm、BamHI三種限制酶切割位點,同時還含有抗四環(huán)素基因和抗氨芐青霉素基因.利用此質(zhì)粒獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草的過程如圖1所示,請回答下列問題.
(1)將抗鹽基因?qū)霟煵菁?xì)胞內(nèi),使煙草植株產(chǎn)生抗鹽性狀,這種新性狀(變異性狀)的來源屬于
.
(2)如果將抗鹽基因直接導(dǎo)入煙草細(xì)胞,一般情況下,煙草不會具有抗鹽特性,原因是抗鹽基因在煙草細(xì)胞中不能
,也不能
.
(3)在構(gòu)建重組質(zhì)粒時,應(yīng)選用
和
兩種酶對
和
進行切割,以保證重組DNA序列的唯一性.
(4)基因工程中的檢測篩選是一個重要的步驟.為篩選出導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌,圖2表示運用影印培養(yǎng)法(使一系列培養(yǎng)皿的相同位置上能出現(xiàn)相同菌落的一種接種培養(yǎng)方法)檢測基因表達(dá)載體是否導(dǎo)入了農(nóng)桿菌.
培養(yǎng)基除了含有細(xì)菌生長繁殖必需的成分外,培養(yǎng)基A和培養(yǎng)基B分別還含有
、
.從檢測篩選的結(jié)果分析,含有目的基因的是
菌落中的細(xì)菌.為了確定抗鹽煙草是否培育成功,既要用放射性同位素標(biāo)記的
作探針進行分子雜交檢測,又要用
方法從個體水平鑒定煙草植株的耐鹽性.
(5)將轉(zhuǎn)入抗鹽基因的煙草細(xì)胞培育成完整的植株需要用
技術(shù),愈傷組織經(jīng)
進而形成完整植株,此過程除營養(yǎng)物質(zhì)外還必須向培養(yǎng)基中添加
.