天然的玫瑰沒(méi)有藍(lán)色花,這是由于缺少控制藍(lán)色色素合成的基因B,而開(kāi)藍(lán)色花的矮牽牛中存在序列已知的基因B。現(xiàn)用基因工程技術(shù)培育藍(lán)玫瑰,下列操作正確的是( )

A.提取矮牽牛藍(lán)色花的mRNA,經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄獲得互補(bǔ)的DNA,再擴(kuò)增基因B

B.利用限制性核酸內(nèi)切酶從開(kāi)藍(lán)色花矮牽牛的基因文庫(kù)中獲取基因B

C.利用DNA聚合酶將基因B與質(zhì)粒連接后導(dǎo)入玫瑰細(xì)胞

D.將基因B直接導(dǎo)入大腸桿菌,然后感染并轉(zhuǎn)入玫瑰細(xì)胞

將ada(腺苷酸脫氨酶基因)通過(guò)質(zhì)粒pET28b導(dǎo)入大腸桿菌并成功表達(dá)腺苷酸脫氨酶。下列敘述錯(cuò)誤的是( )

A.每個(gè)大腸桿菌細(xì)胞至少含一個(gè)重組質(zhì)粒

B.每個(gè)重組質(zhì)粒至少含一個(gè)限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)

C.每個(gè)限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)至少插入一個(gè)ada

D.每個(gè)插入的ada至少表達(dá)一個(gè)腺苷酸脫氨酶分子

閱讀如下資料:

資料甲:科學(xué)家將牛生長(zhǎng)激素基因?qū)�入小鼠受精卵�?得到了體型巨大的“超級(jí)小鼠”;科學(xué)家采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法培育出轉(zhuǎn)基因煙草。

回答下列問(wèn)題:

資料甲屬于基因工程的范疇。將基因表達(dá)載體導(dǎo)入小鼠的受精卵中常用 法。構(gòu)建基因表達(dá)載體常用的工具酶是 和 。在培育有些轉(zhuǎn)基因植物時(shí),常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法,農(nóng)桿菌的作用是 。

普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱,有人將地衣芽孢桿菌的α淀粉酶基因轉(zhuǎn)入酵母菌中,經(jīng)篩選得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌種(過(guò)程如圖甲所示)。

(1)圖甲中,過(guò)程①需要的酶有 。為達(dá)到篩選目的,平板內(nèi)的固體培養(yǎng)基應(yīng)以

作為唯一碳源。②、③過(guò)程需重復(fù)幾次,目的是   。

(2)某同學(xué)嘗試過(guò)程③的操作,其中一個(gè)平板經(jīng)培養(yǎng)后的菌落分布如圖乙所示。該同學(xué)的接種方法是 ;推測(cè)該同學(xué)接種時(shí)可能的操作失誤是 。 

(3)以淀粉為原料,用工程酵母菌和普通酵母菌在相同的適宜條件下密閉發(fā)酵,接種 菌的發(fā)酵罐需要先排氣,其原因是 。

(4)用凝膠色譜法分離α淀粉酶時(shí),在色譜柱中移動(dòng)速度較慢的蛋白質(zhì),相對(duì)分子質(zhì)量較 。 

根據(jù)基因工程的有關(guān)知識(shí),回答下列問(wèn)題:

(1)限制性?xún)?nèi)切酶切割DNA分子后產(chǎn)生的片段,其末端類(lèi)型有 和 。

(2)質(zhì)粒運(yùn)載體用EcoRⅠ切割后產(chǎn)生的片段如下:

AATTC……G

G……CTTAA

為使運(yùn)載體與目的基因相連,含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外,還可用另一種限制性?xún)?nèi)切酶切割,該酶必須具有的特點(diǎn)是 。

(3)按其來(lái)源不同,基因工程中所使用的DNA連接酶有兩類(lèi),即 DNA連接酶和 DNA連接酶。

(4)反轉(zhuǎn)錄作用的模板是 ,產(chǎn)物是 。若要在體外獲得大量反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物,常采用 技術(shù)。

(5)基因工程中除質(zhì)粒外, 和 也可作為運(yùn)載體。

(6)若用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌,一般情況下,不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細(xì)胞,原因是  。

圖1表示含有目的基因D的DNA片段長(zhǎng)度(bp即堿基對(duì))和部分堿基序列,圖2表示一種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和部分堿基序列�，F(xiàn)有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ 4種限制性核酸內(nèi)切酶,它們識(shí)別的堿基序列和酶切位點(diǎn)分別為C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。請(qǐng)回答下列問(wèn)題:

(1)圖1的一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個(gè)堿基之間依次由 連接。

(2)若用限制酶SmaⅠ完全切割圖1中DNA片段,產(chǎn)生的末端是 末端,其產(chǎn)物長(zhǎng)度為 。

(3)若圖1中虛線(xiàn)方框內(nèi)的堿基對(duì)被TA堿基對(duì)替換,那么基因D就突變?yōu)榛�因d。從雜合子中分離出圖1及其對(duì)應(yīng)的DNA片段,用限制酶SmaⅠ完全切割,產(chǎn)物中共有 種不同長(zhǎng)度的DNA片段。

(4)若將圖2中質(zhì)粒和目的基因D通過(guò)同種限制酶處理后進(jìn)行連接,形成重組質(zhì)粒,那么應(yīng)選用的限制酶是 。在導(dǎo)入重組質(zhì)粒后,為了篩選出含重組質(zhì)粒的大腸桿菌,一般需要用添加的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。經(jīng)檢測(cè),部分含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌株中目的基因D不能正確表達(dá),其最可能的原因是   。

家蠶細(xì)胞具有高效表達(dá)外源基因的能力。將人干擾素基因?qū)�入家蠶細(xì)胞并大規(guī)模培養(yǎng),可提取干擾素用于制藥。

(1)進(jìn)行轉(zhuǎn)基因操作前,需用 酶短時(shí)處理幼蠶組織,以便獲得單個(gè)細(xì)胞。

(2)為使干擾素基因在家蠶細(xì)胞中高效表達(dá),需要把來(lái)自cDNA文庫(kù)的干擾素基因片段正確插入表達(dá)載體的 和 之間。

(3)采用PCR技術(shù)可驗(yàn)證干擾素基因是否已經(jīng)導(dǎo)入家蠶細(xì)胞。該P(yáng)CR反應(yīng)體系的主要成分應(yīng)包含:擴(kuò)增緩沖液(含Mg2+)、水、4種脫氧核糖核苷酸、模板DNA、 和 。

(4)利用生物反應(yīng)器培養(yǎng)家蠶細(xì)胞時(shí),貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生接觸抑制。通常將多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反應(yīng)器中,這樣可以 增加培養(yǎng)的細(xì)胞數(shù)量,也有利于空氣交換。

下列有關(guān)基因工程的敘述,正確的是( )

A.目的基因?qū)�入受體細(xì)胞后,一定能穩(wěn)定遺傳

B.DNA連接酶的作用是將兩個(gè)黏性末端的堿基連接起來(lái)

C.基因表達(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的核心

D.常用的運(yùn)載體有大腸桿菌、噬菌體和動(dòng)植物病毒等

下列不屬于有效篩選出含目的基因受體細(xì)胞的方法是( )

A.檢測(cè)受體細(xì)胞是否有質(zhì)粒

B.檢測(cè)受體細(xì)胞是否有目的基因

C.檢測(cè)受體細(xì)胞是否有目的基因表達(dá)產(chǎn)物

D.檢測(cè)受體細(xì)胞是否有目的基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA

基因工程利用某目的基因(圖甲)和Pl噬菌體載體(圖乙)構(gòu)建重組DNA。限制性核酸內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)分別是BglⅡ、EcoRⅠ和Sau3AⅠ。下列分析錯(cuò)誤的是( )

A.構(gòu)建重組DNA時(shí),可用BglⅡ和Sau3AⅠ切割目的基因和Pl噬菌體載體

B.構(gòu)建重組DNA時(shí),可用EcoRⅠ和Sau3AⅠ切割目的基因和Pl噬菌體載體

C.圖乙中的Pl噬菌體載體只用EcoRⅠ切割后,含有2個(gè)游離的磷酸基團(tuán)

D.用EcoRⅠ切割目的基因和Pl噬菌體載體,再用DNA連接酶連接,只能產(chǎn)生一種重組DNA