mtDNA是存在于人類細(xì)胞線粒體中雙鏈閉合環(huán)狀的DNA分子，具有自我復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和控制合成蛋白質(zhì)的功能。mtDNA的類型具有明顯的種族特異性。若用兩種識(shí)別切割序列完全不同的限制酶M和N切割某人的mtDNA，通過(guò)凝膠電泳分離分析得下表。限制酶M和N的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)如圖所示。

⑴．該mtDNA的長(zhǎng)度為_(kāi)__________kb。在該DNA分子中，M酶與N酶的切割位點(diǎn)分別有____________個(gè)。

⑵．M酶與N酶切出的能相互粘連的末端能在______________酶的作用下相互連接，請(qǐng)將連接的結(jié)果表示出來(lái)：_______________________。連接后的序列是否可以用M酶、N酶進(jìn)行切割，并簡(jiǎn)述理由：_________________________________________________

⑶．有人認(rèn)為mtDNA能成為研究人類起源與進(jìn)化的一個(gè)有力工具，請(qǐng)簡(jiǎn)述理由：_________________________________________________________________________ 。

下圖為真核細(xì)胞的某基因的結(jié)構(gòu)圖以及限制酶M和N的切割位點(diǎn)。

⑷．現(xiàn)用該基因作為目的基因，若采用直接從供體細(xì)胞中分離，具體方法是：_____________。這個(gè)方法雖操作方便，但切割下的基因中含有不能指導(dǎo)蛋白質(zhì)合成的區(qū)域。因此，目前往往采用逆轉(zhuǎn)錄的人工合成的方法，其基本步驟是：__________________________。

⑸．已知Ⅱ區(qū)的堿基數(shù)是2000個(gè)，其中陰影區(qū)域堿基數(shù)是800個(gè)，空白區(qū)域中G和C的總數(shù)共有400個(gè)，則由該區(qū)轉(zhuǎn)錄的mRNA中A和U總數(shù)是               。

（5分）番茄果實(shí)成熟過(guò)程中，某種酶（PG）開(kāi)始合成并顯著增加，促使果實(shí)變紅變軟，但不利于長(zhǎng)途運(yùn)輸和長(zhǎng)期保鮮。科學(xué)家利用反義RNA技術(shù)（見(jiàn)圖解），可有效解決此問(wèn)題。該技術(shù)的核心是：從番茄體細(xì)胞中獲得指導(dǎo)PG合成的信使RNA，繼而以該信使RNA為模板，人工合成反義基因并將之導(dǎo)入離體番茄體細(xì)胞，經(jīng)組織培養(yǎng)獲得完整植株；新植株在果實(shí)發(fā)育過(guò)程中，反義基因經(jīng)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的反義RNA與細(xì)胞原有mRNA（靶mRNA）互補(bǔ)形成雙鏈RNA，阻止靶mRNA進(jìn)一步翻譯形成PG，從而達(dá)到抑制果實(shí)成熟的目的。請(qǐng)結(jié)合圖解回答：

（1）反義基因像一般基因一樣是一段雙鏈的DNA分子，合成該分子的第一條鏈時(shí)，使用的模板是細(xì)胞質(zhì)中的信使RNA，原料是四種      　　　　，所用的酶是     　　　 。

（2）將人工合成的反義基因?qū)敕讶~肉細(xì)胞原生質(zhì)體的運(yùn)輸工具是__________；該目的基因與運(yùn)輸工具相結(jié)合需要使用的酶有______________；在受體細(xì)胞中該基因指導(dǎo)合成的最終產(chǎn)物是_____________________

（14分）番茄果實(shí)成熟過(guò)程中，某種酶（PG）開(kāi)始合成并顯著增加，促使果實(shí)變紅變軟。但不利于長(zhǎng)途運(yùn)輸和長(zhǎng)期保鮮�？茖W(xué)家利用反義RNA技術(shù)（見(jiàn)圖解），可有效解決此問(wèn)題。該技術(shù)的核心是，從番茄體細(xì)胞中獲得指導(dǎo)PG合成的信使RNA，繼而以該信使RNA為模板人工合成反義基因并將之導(dǎo)入離體番茄體細(xì)胞，經(jīng)組織培養(yǎng)獲得完整植株。新植株在果實(shí)發(fā)育過(guò)程中，反義基因經(jīng)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的反義RNA與細(xì)胞原有mRNA（靶mRNA）互補(bǔ)形成雙鏈RNA，阻止靶mRNA進(jìn)一步翻譯形成PG，從而達(dá)到抑制果實(shí)成熟的目的。請(qǐng)結(jié)合圖解回答：

（1）反義基因像一般基因一樣是一段雙鏈的DNA分子，合成該分子的第一條鏈時(shí)，使用的模板是細(xì)胞質(zhì)中的信使RNA，原料是四種                  ，所用的酶是                      。

（2）開(kāi)始合成的反義基因第一條鏈?zhǔn)桥c模板RNA連在一起的雜交雙鏈，通過(guò)加熱去除RNA，然后再以反義基因第一條鏈為模板合成第二條鏈，這樣一個(gè)完整的反義基因被合成。若要以完整雙鏈反義基因克隆成百上千的反義基因，所用復(fù)制方式為                       。

（3）如果指導(dǎo)番茄合成PG的信使RNA的堿基序列是―A―U―C―C―A―G―G―U―C―，那么，PG反義基因的這段堿基對(duì)序列是                                  。

（4）將人工合成的反義基因?qū)敕讶~肉細(xì)胞原生質(zhì)體的運(yùn)輸工具是               ，  該目的基因與運(yùn)輸工具相結(jié)合需要使用的酶有                 ，在受體細(xì)胞中該基因指導(dǎo)合成的最終產(chǎn)物是                   。

番茄果實(shí)成熟過(guò)程中，某種酶(PG)開(kāi)始合成并顯著增加，促使果實(shí)變紅變軟。但不利于長(zhǎng)途運(yùn)輸和長(zhǎng)期保鮮�？茖W(xué)家利用反義RNA技術(shù)(見(jiàn)圖解)，可有效解決此問(wèn)題。該技術(shù)的核心是，從番茄體細(xì)胞中獲得指導(dǎo)PG合成的信使RNA，繼而以該信使RNA為模板人工合成反義基因并將之導(dǎo)入離體番茄體細(xì)胞，經(jīng)組織培養(yǎng)獲得完整植株。新植株在果實(shí)發(fā)育過(guò)程中，反義基因經(jīng)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的反義RNA與細(xì)胞原有mRNA(靶mRNA)互補(bǔ)形或雙鏈RNA，阻止靶mRNA進(jìn)一步翻譯形成PG，從而達(dá)到抑制果實(shí)成熟的目的。請(qǐng)結(jié)合圖解回答：

(1)若要將人工合成的完整反義基因克隆出成百上千的反義基因，可用        (寫出中文名稱)技術(shù)實(shí)現(xiàn)體外快速擴(kuò)增。

(2)假設(shè)PCR反應(yīng)中的初始只有一個(gè)DNA作為模板， n輪循環(huán)的產(chǎn)物中含有模板DNA鏈的DNA分子有     個(gè)、含有人工合成的DNA引物的DNA分子有    個(gè)。若DNA分子中共含900個(gè)堿基對(duì)，堿基數(shù)量滿足：(A+T)／(G+C)=1／2，經(jīng)5次循環(huán)，至少需要向試管中加入     個(gè)腺嘌呤脫氧核苷酸(不考慮引物所對(duì)應(yīng)的片段)。

(3)PCR反應(yīng)中所用到的酶是      ，其具有       的特性。

(4)普通番茄細(xì)胞導(dǎo)入目的基因后，先要接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，脫分化后得到           ，再轉(zhuǎn)接到分化培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)出試管苗，然后進(jìn)一步培養(yǎng)成正常植株。