Question

【題目】若長期使用某種除草劑（有機(jī)物），會對土壤造成嚴(yán)重污染。如圖是從土壤中分離出能降解該除草劑菌株的實(shí)驗(yàn)過程。請回答下列問題：

選擇土壤→土壤樣品選擇培養(yǎng)劃線純化獲得菌種

（1）為了獲取能降解該除草劑的菌株，選擇的土壤樣品應(yīng)來自____________。

（2）圖中A過程所用的培養(yǎng)基中不能添加其他有機(jī)物，理由是____________。若圖中B過程在一個平板的5個區(qū)域內(nèi)劃線，則劃線工具需灼燒滅菌____________次。

（3）圖中A、B、C過程所用培養(yǎng)基中應(yīng)含有四類營養(yǎng)成分，即_______________________。

（4）若要推算該土壤樣品中的細(xì)菌含量，應(yīng)采用____________法進(jìn)行接種。先將1 mL 土壤溶液稀釋100倍，然后隨機(jī)選取6個滅菌處理的平板，其中4個平板上分別接入 0.1 mL稀釋液，2個平板未接入稀釋液，經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，6個平板上的菌落數(shù)分別為52、49、51、48、0和0。

①由未接入稀釋液的平板所長菌落情況，可得出的結(jié)論是________________________。

②經(jīng)計(jì)算可得出每毫升土壤溶液中的活菌數(shù)為____________個，該結(jié)果往往偏小，原因是____________。

Answer 1

【答案】 被該除草劑嚴(yán)重污染的土壤 選擇培養(yǎng)基中除草劑為唯一碳源，其他有機(jī)物也屬于碳源 6 水、無機(jī)鹽、碳源和氮源 稀釋徐布平板 平板（培養(yǎng)基）未被污染 5.0×104 當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的只有一個菌落

【解析】試題分析：為了從土壤中分離出能降解該除草劑的菌株，常常需要從曾被該除草劑嚴(yán)重污染過的土壤提取樣品才可能含有該分解菌。通過人工配制選擇培養(yǎng)基，即只含該除草劑為唯一碳源的培養(yǎng)基，目的只允許目的菌株生長和繁殖，而不能利用除草劑的微生物則遭到淘汰。再經(jīng)過平板劃線法或者稀釋涂布平板法進(jìn)行接種培養(yǎng)、分離、純化。若還需要對樣品中該菌進(jìn)行計(jì)數(shù)，則只能用稀釋涂布平板法接種、培養(yǎng)、計(jì)數(shù)。

（1）由于只有被除草劑污染過的土壤才可能含有分解該除草劑的分解菌，所以為了獲取能降解該除草劑的菌株，最好從被該除草劑嚴(yán)重污染的土壤采集土壤樣品。

（2）結(jié)合前面的分析可知，為了淘汰不能分解該除草劑的微生物，而僅保留能分解除草劑的菌種，則在配制選擇培養(yǎng)基時應(yīng)只含除草劑作為唯一碳源，若添加了其他有機(jī)物，則碳源不唯一而達(dá)不到篩選目的，所以圖中A過程所用的培養(yǎng)基中不能添加其他有機(jī)物。由于每次劃線之前都要灼燒一次且劃線結(jié)束后也要灼燒滅菌，所以圖中B過程在一個平板的5個區(qū)域內(nèi)劃線，則劃線工具需灼燒滅菌6次。

（3）普通培養(yǎng)基中都應(yīng)含有四類營養(yǎng)成分，即水、無機(jī)鹽、碳源和氮源。

（4）若要推算該土壤樣品中的細(xì)菌含量，應(yīng)采用稀釋涂布平板法進(jìn)行接種，若采用平板劃線法只能分離純化菌種，而不能通過數(shù)菌落來推算樣品中目的菌含量。實(shí)驗(yàn)過程中，為了檢查平板培養(yǎng)基滅菌是否合格，常常需要留一個空白培養(yǎng)基平板不接種，觀察是否有菌落生成。結(jié)合題意，根據(jù)0.1mL稀釋100倍的菌液接種培養(yǎng)得到的4個平板的菌落數(shù)計(jì)算：每毫升土壤溶液中的活菌數(shù)=（52+49+51+48）÷4÷0.1×100= 5.0×104個。由于稀釋涂布平板法得到的菌落常常存在是兩個或多個細(xì)菌連在一起而最后在平板上只觀察到一個菌落的情況，所以估算值比實(shí)際值要小。