Question

2．骨肉瘤是最常見的惡性成骨性腫瘤之一．科研人員研究曲古抑菌A（TSA）對人骨肉瘤細胞凋亡的影響及作用機制，為臨床治療尋找新方向．實驗過程如下：
步驟1  用含青霉素和鏈霉素的高糖培養(yǎng)基，在37℃、5% CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)人骨肉瘤細胞一段時間．
步驟2  取適宜濃度的處于生長旺盛期的人類骨肉瘤細胞，用加入不同濃度的TSA（0～200ng•mL^-1）的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24h．
步驟3  對各組細胞進行抽樣檢測，檢測方法是先用臺盼藍試劑（一種細胞活性染料）染色再用血細胞計數(shù)板計數(shù)，統(tǒng)計細胞存活率（未染色細胞數(shù)/細胞總數(shù)×100%），結(jié)果如圖1．
步驟4  分別提取TSA濃度為0ng•mL^-1、25ng•mL^-1、50ng•mL^-1處理的3組細胞，測量細胞中與凋亡相關(guān)的基因（Bax、Bcl-2）和β-肌動蛋白基因（不同的組織細胞中表達相對恒定）表達的蛋白質(zhì)量并計算比值，結(jié)果如圖2．

分析回答：
（1）與正常成骨細胞相比，骨肉瘤細胞容易在體內(nèi)分散和轉(zhuǎn)移，其主要原因是骨肉瘤細胞膜上的糖蛋白等物質(zhì)減少．高糖培養(yǎng)基中加入青霉素和鏈霉素的目的是防止雜菌污染，細胞培養(yǎng)箱中保持5% CO₂的作用是維持培養(yǎng)液pH．
（2）步驟2中，設(shè)置0ng•mL^-1 TSA實驗的主要目的是排除非測試因素對實驗結(jié)果的影響．
（3）用臺盼藍試劑檢測細胞活性的主要原理是活細胞的細胞膜具有選擇透過性，臺盼藍不能進入活細胞內(nèi)（死細胞膜失去選擇透過性，臺盼藍能進入死細胞內(nèi)）．
（4）圖1所示結(jié)果表明TSA濃度越高對骨肉瘤細胞凋亡的促進作用越強．
（5）根據(jù)圖2判斷，骨肉瘤細胞中Bax基因過度表達會加速細胞凋亡．

Answer 1

分析 分析圖1：隨著處理的TSA濃度增加骨肉瘤細胞的存活率下降，說明TSA濃度增加對骨肉瘤細胞凋亡的促進作用增強．
分析圖2：隨著處理的TSA濃度增加，Bcl-2蛋白/β-肌動蛋白的比值降低．
分析圖3：隨著處理的TSA濃度增加，Bax蛋白/β-肌動蛋白的比值升高．

解答 解：（1）與正常成骨細胞相比，骨肉瘤細胞容易在體內(nèi)分散和轉(zhuǎn)移，其主要原因是骨肉瘤細胞膜上的糖蛋白等物質(zhì)減少．高糖培養(yǎng)基中加入青霉素和鏈霉素的目的是防止雜菌污染．細胞培養(yǎng)箱中保持5% CO₂的作用是維持培養(yǎng)液pH．
（2）生物學實驗中通常要設(shè)置對照實驗，其中空白對照實驗的作用是排除非測量因素（實驗自變量以外的影響實驗結(jié)果的因素）對實驗結(jié)果的影響．
（3）用臺盼藍試劑檢測細胞活性的主要原理是活細胞的細胞膜具有選擇透過性，臺盼藍不能進入活細胞內(nèi)．
（4）根據(jù)圖1顯示實驗結(jié)果是隨著處理的TSA濃度增加骨肉瘤細胞的存活率下降，說明TSA濃度增加對骨肉瘤細胞凋亡的促進作用增強，注意實驗結(jié)果說明（結(jié)論）不等于實驗結(jié)果．
（5）圖2實驗結(jié)果顯示，TSA濃度越高Bcl-2表達蛋白質(zhì)越少，而Bax表達蛋白質(zhì)越多，說明前者蛋白質(zhì)是抑制細胞凋亡而后者旺盛表達促進細胞凋亡．
故答案為：
（1）骨肉瘤細胞膜上的糖蛋白等物質(zhì)減少    防止雜菌污染    維持培養(yǎng)液pH
（2）排除非測試因素對實驗結(jié)果的影響
（3）活細胞的細胞膜具有選擇透過性，臺盼藍不能進入活細胞內(nèi)（死細胞膜失去選擇透過性，臺盼藍能進入死細胞內(nèi)）
（4）TSA濃度越高對骨肉瘤細胞凋亡的促進作用越強
（5）Bax

點評 本題以實驗為載體，綜合考查動物細胞培養(yǎng)、細胞癌變、細胞凋亡及相關(guān)的探究實驗，要求考生識記動物細胞培養(yǎng)的條件；識記細胞癌變的原因及癌細胞的主要特征，能正確分析曲線圖，并能結(jié)合圖中信息準確答題．