Question

【題目】幽門螺桿菌(Hp)感染是急慢性胃炎和消化道潰瘍的主要致病因素，其不良預(yù)后是胃癌。據(jù)研究發(fā)現(xiàn)，目前我國有超過50%人感染了Hp病菌。Hp是微需氧菌，環(huán)境氧要求5%～8%，在大氣或絕對厭氧環(huán)境下均能生長，Hp的尿素酶極為豐富，尿素酶催化尿素水解形成“氨云”保護細菌在高酸環(huán)境下生存。

在患者體內(nèi)采集樣本并制成菌液后，進行分離培養(yǎng)。實驗基本步驟如下：

配制培養(yǎng)基→滅菌、倒平板→X→培養(yǎng)→觀察。請回答：

⑴在配制培養(yǎng)基時，要加入尿素和酚紅指示劑，這是因為Hp含有____，它能以尿素作為氮源；若有Hp，則菌落周圍會出現(xiàn)____色環(huán)帶。

⑵步驟X的操作如下圖所示：

①微生物接種的方法很多，但都要注意____；上圖所示方法為____。

②圖示每次取樣前需用手指輕壓移液管上的橡皮頭，吹吸三次，目的是____。

③下列關(guān)于此實驗的操作，正確的是____。

A．高壓蒸汽滅菌加熱結(jié)束時，打開放氣閥使壓力表指針回到零后，開啟鍋蓋

B．含酚紅指示劑的尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基滅菌后，冷卻至室溫倒平板

C．取103、104、105倍的稀釋液和無菌水各0.1mL，分別涂布于各組平板上

D．在皿蓋上用記號筆做標記

⑶在培養(yǎng)時，需將培養(yǎng)皿____并放在恒溫培養(yǎng)箱中,否則將可能導(dǎo)致____。

⑷臨床上14C呼氣試驗檢測是一種安全、準確的檢測Hp的方法，其基本原理是當(dāng)被檢測者服用含有____的膠囊后，如患者的胃內(nèi)存在Hp感染，則可將其分解為氨和14CO2。

Answer 1

【答案】 尿素酶 紅 防止雜菌的污染 稀釋涂布平板法 使微生物和無菌水混合均勻 C 倒置 無法形成單一菌落 14C標記尿素

【解析】試題分析：細菌分解在尿素的過程中合成脲酶，脲酶將尿素分解成氨，會使培養(yǎng)基堿性增強，PH升高，所以可以用檢測pH的變化的方法來判斷尿素是否被分解，可在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，尿素被分解后產(chǎn)生氨，PH升高，指示劑變紅。

（1）由于尿素分解細菌能合成脲酶，脲酶能將尿素分解成氨，而氨會使培養(yǎng)基堿性增強，即pH升高，導(dǎo)致酚紅指示劑變紅。

（2）①微生物接種的方法很多，但都要注意防止雜菌的污染；接種微生物常用平板劃線法和稀釋涂布平板法，圖示所示為稀釋涂布平板法。

②圖示每次取樣前需用手指輕壓移液管上的橡皮頭，吹吸三次，目的是使微生物和無菌水混合均勻。

③高壓滅菌加熱結(jié)束，等待壓力表指針回到零后，才能開啟鍋蓋，不能打開放氣閥使壓力表指針回到零，A錯誤；含酚紅指示劑的尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基滅菌后，冷卻至50℃左右倒平板，不需要冷卻到室溫，B錯誤；取103、104、105倍的稀釋液和無菌水各0.1mL，分別涂布于各組平板上，C正確；用記號筆標記培養(yǎng)皿中菌落時，應(yīng)標記在皿底上，D錯誤．。

（3）培養(yǎng)時需將培養(yǎng)皿倒置并放在恒溫箱中培養(yǎng)，倒置培養(yǎng)的目的也是為了獲得單一菌落。

（4）如果人體感染了Hp，能將尿素分解為NH3和CO2，因而標記尿素中的C，可通過呼吸產(chǎn)物來判斷是否感染Hp。