Question

苯酚（C₆H₅OH）是廣泛存在于化工行業(yè)廢水中的一種污染物．為了分離和純化高效分解苯酚的細(xì)菌．科研人員進(jìn)行了如圖1所示的相關(guān)試驗(yàn)．（實(shí)驗(yàn)中的LB培養(yǎng)基能使菌種成倍增加）

（1）該實(shí)驗(yàn)需要用到的實(shí)驗(yàn)儀器有：錐形瓶、培養(yǎng)皿、

 

（寫出2種即可，但必須是微生物培養(yǎng)專用）．
（2）理論上，步驟②中的LB培養(yǎng)基含有的營養(yǎng)物質(zhì)除了碳源外，還有

 

等（多選）．
A．氮源     B．激素      C．酶    D．生長(zhǎng)因子    E．伊紅美藍(lán)．
（3）步驟③培養(yǎng)基成分中的苯酚作為細(xì)菌培養(yǎng)唯一的

 

；步驟③和④中的培養(yǎng)基最主要的成分差異是后者添加了

 

．步驟②、③、④的培養(yǎng)基必須經(jīng)過滅菌，其具體要求是

 

．
（4）經(jīng)步驟④培養(yǎng)后的菌落如圖2，則接種時(shí)甲、乙、丙三個(gè)區(qū)域的操作順序是

 

．多次劃線后，最終可以得到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來的

 

．
（5）步驟④的目的是

 

；經(jīng)過步驟⑤培養(yǎng)后，應(yīng)該從殘余苯酚濃度

 

的培養(yǎng)瓶中再分離、再培養(yǎng)目的菌株．

Answer 1

考點(diǎn)：微生物的分離和培養(yǎng)

專題：

分析：解答本題需掌握：（1）滅菌的方法主要有灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌．灼燒滅菌適合于接種工具的滅菌，一般來說是在操作過程中金屬類的接種工具．干熱滅菌適合于玻璃器皿、金屬工具的滅菌．高壓蒸汽滅菌適合于玻璃器皿、接種工具以及培養(yǎng)基．特別注意培養(yǎng)基的滅菌只能用高壓蒸汽滅菌．
（2）微生物的營養(yǎng)物質(zhì)有5類，分別是水、無機(jī)鹽、碳源、氮源及特殊生長(zhǎng)因子．
（3）培養(yǎng)基的分類及用途

劃分標(biāo)準(zhǔn)	培養(yǎng)基種類	特點(diǎn)	用途
物理性質(zhì)	液體培養(yǎng)基	不加凝固劑	工業(yè)生產(chǎn)
	固體培養(yǎng)基	加凝固劑，如瓊脂	微生物的分離、鑒定、活種計(jì)數(shù)、保藏菌種
化學(xué)成分	天然培養(yǎng)基	含化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)	工業(yè)生產(chǎn)
	合成培養(yǎng)基	培養(yǎng)基成分明確（用化學(xué)成分已知的化學(xué)物質(zhì)配成）	分類、鑒定
用途	選擇培養(yǎng)基	培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的不需要的微生物的生長(zhǎng)，促進(jìn)所需要的微生物生長(zhǎng)	培養(yǎng)、分離出特定的微生物（如培養(yǎng)酵母菌和霉菌，可在培養(yǎng)基中加入青霉素；培養(yǎng)金黃色葡萄球菌，可在培養(yǎng)基中加入高濃度的食鹽）
	鑒別培養(yǎng)基	根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品	鑒別不同種類的微生物，如可用伊紅-美藍(lán)培養(yǎng)基鑒別飲用水或乳制品中是否有大腸桿菌（若有，菌落呈深紫色，并帶有金屬光澤）

（4）微生物的分離
①依據(jù)某些微生物的特殊營養(yǎng)需求設(shè)計(jì)培養(yǎng)基．例如利用以纖維素或石蠟作為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基，可以從混雜的微生物群體中分離出分解纖維素或石蠟油的微生物；缺乏氮源的選擇培養(yǎng)基可用來分離固氮微生物；分離自養(yǎng)型的微生物在培養(yǎng)基中不加碳源即可，因?yàn)樽责B(yǎng)型的微生物能夠利用空氣中的碳源（二氧化碳）．
②在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，這種化學(xué)物質(zhì)沒有營養(yǎng)作用，對(duì)所需分離的微生物無害，但可以抑制或殺死其他微生物．例如分離金黃色葡萄球菌時(shí)，在培養(yǎng)基中加入7.5% NaCl，金黃色葡萄球菌可耐高濃度 NaCl，經(jīng)過培養(yǎng)以后，能夠生長(zhǎng)的可能就是金黃色葡萄球菌，再通過進(jìn)一步鑒定加以確定；從土壤中分離放線菌時(shí)，可在培養(yǎng)基中加入10%的酚數(shù)滴，抑制細(xì)菌和真菌的生長(zhǎng)；從細(xì)菌中分離酵母菌時(shí)，可在培養(yǎng)基中加入抗生素，則細(xì)菌不能生長(zhǎng)，而酵母菌能夠生長(zhǎng)．

解答： 解：（1）微生物分離實(shí)驗(yàn)的過程中常用的儀器有錐形瓶、培養(yǎng)皿、高壓滅菌鍋、超凈工作臺(tái)、接種環(huán)（針）、涂布器等．
（2）培養(yǎng)基中必須添加的微生物的營養(yǎng)物質(zhì)有5類，分別是水、無機(jī)鹽、碳源、氮源及特殊生長(zhǎng)因子，故選AD．
（3）該實(shí)驗(yàn)中苯酚作為細(xì)菌培養(yǎng)唯一的碳源，步驟③和④中的培養(yǎng)基最主要的成分差異是后者添加了瓊脂，培養(yǎng)基需用高壓蒸汽滅菌，其具體要求是121℃，1.05kg/cm²，15～30分鐘．
（4）利用平板劃線法接種時(shí)，由圖可知，劃線順序應(yīng)為甲→乙→丙，最終可以得到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來的單個(gè)菌落．
（5）步驟④的目的是分離純化菌種，經(jīng)過步驟⑤培養(yǎng)后，應(yīng)該從殘余苯酚濃度最低的培養(yǎng)瓶中再分離、再培養(yǎng)目的菌株．
故答案為：（1）高壓滅菌鍋、超凈工作臺(tái)、接種環(huán)（針）
（2）A、D
（3）碳源    瓊脂    121℃，1.05kg/cm²，15～30分鐘
（4）甲→乙→丙    單個(gè)菌落
（5）分離純化    最低

點(diǎn)評(píng)：微生物這部分內(nèi)容是選修一的熱點(diǎn)，在考查選修一的知識(shí)點(diǎn)的時(shí)候，為了增加考查的知識(shí)點(diǎn)的面，命題人往往將微生物、酶、植物有效成分的提取相關(guān)的知識(shí)點(diǎn)組合在一起進(jìn)行考查，在復(fù)習(xí)一定要注意之間的聯(lián)系．