Question

2．最近，科學家培育出一種轉(zhuǎn)基因小鼠，其膀胱上皮細胞可以合成人的生長激素并將其分泌到尿液中．這是繼哺乳動物乳腺生物反應(yīng)器研發(fā)成功后，在膀胱生物反應(yīng)器研究上另一進展．
（1）將人的生長激素基因?qū)�入小鼠受體細胞，常用的方法是顯微注射法．所使用到儀器是顯微操作儀．
（2）在基因工程中，將目的基因與運載體結(jié)合時，必須用同種限制酶和DNA連接酶．常用的運載體有質(zhì)粒、動植物病毒、噬菌體的衍生物等，而作為運載體必須具備相應(yīng)的條件，例如應(yīng)具有標記基因以便進行篩選．進行基因轉(zhuǎn)移時，通常要將外源基因轉(zhuǎn)入動物的受精卵（或早期胚胎）中，原因是受精卵（或早期胚胎細胞）具有全能性，可使外源基因在相應(yīng)組織細胞表達．
（3）通常采用DNA分子雜交（核酸探針）技術(shù)檢測外源基因是否插入了小鼠的基因組中．
（4）在研究膀胱生物反應(yīng)器時，應(yīng)使外源基因在小鼠的膀胱上皮細胞中特異性表達．
（5）如果將藥物蛋白基因轉(zhuǎn)入動物如牛、羊的膀胱上皮細胞中，從轉(zhuǎn)基因牛、羊尿液中提取藥物比從乳汁中提取藥物的更大優(yōu)越性在于不受時間和性別的限制．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
1、目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成．
2、基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
3、將目的基因?qū)�入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法．
4、目的基因的檢測與鑒定：（1）分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．（2）個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）將目的基因?qū)�入動物細胞最有效的方法是顯微注射法，所用的儀器為顯微操作儀．
（2）在基因工程中，構(gòu)建基因表達載體時，需先用同種限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和運載體，還需要用DNA連接酶將目的基因與運載體結(jié)合形成重組DNA．常用的運載體有質(zhì)粒、動植物病毒、噬菌體的衍生物等，而作為運載體必須具備相應(yīng)的條件，例如應(yīng)具有標記基因以便進行篩選．由于受精卵（或早期胚胎細胞）具有全能性，可使外源基因在相應(yīng)組織細胞表達，因此進行基因轉(zhuǎn)移時，通常要將外源基因轉(zhuǎn)入受精卵（或早期胚胎）中．
（3）檢測目的基因是否插入了小鼠的基因組通常采用DNA分子雜交技術(shù)．
（4）在研制膀胱生物反應(yīng)器時，應(yīng)在目的基因前加膀胱組織特異性表達的啟動子，使外源基因在小鼠的膀胱上皮細胞中特異表達．
（5）從轉(zhuǎn)基因牛羊尿液中提取藥物不受時間和性別的限制，而從動物乳汁中提取藥物則受到限制．
故答案為：
（1）顯微注射法     顯微操作儀
（2）同種限制    DNA連接      質(zhì)粒     動植物病毒     噬菌體的衍生物     標記基因      受精卵（或早期胚胎）      受精卵（或早期胚胎細胞）具有全能性，可使外源基因在相應(yīng)組織細胞表達．
（3）DNA分子雜交（核酸探針）
（4）膀胱上皮
（5）不受時間和性別的限制

點評 本題綜合考查基因工程技術(shù)方面的知識，要求考生識記基因工程的原理、操作步驟及應(yīng)用；識記目的基因檢測與鑒定的方法；明確動物受體細胞運用顯微注射法，并能結(jié)合所學的知識準確答題．