Question

【題目】用基因工程技術(shù)生產(chǎn)羧酸酯酶(CarE)制劑的流程如圖所示�；卮鹣铝袉栴}:

(1)①過程所需的酶是_____。從cDNA文庫中獲取的目的基因______(填“有”或“無”)啟動子。實現(xiàn)②過程常用_____技術(shù),該技術(shù)的前提是要有_______,以便合成引物。

(2)過程⑧將重組表達(dá)載體導(dǎo)入大腸桿菌時,首先用Ca2+處理大腸桿菌,目的是_____。然后將______溶于緩沖液中與該大腸桿菌混合,在一定溫度下完成轉(zhuǎn)化。

(3)過程④可利用________技術(shù)鑒定CarE基因是否已導(dǎo)入大腸桿菌。

Answer 1

【答案】逆轉(zhuǎn)錄酶 無 PCR 一段已知目的基因的核苷酸序列 使大腸桿菌處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài) 重組表達(dá)質(zhì)粒 DNA分子雜交

【解析】

1、將某種生物體內(nèi)的DNA全部提取出來，用適當(dāng)?shù)南拗泼�，�?/span>DNA切成一定范圍大小的DNA片段，然后，將這些DNA片段分別與載體連接起來，導(dǎo)入受體菌的群體中儲存，這個受體菌群體就叫做這種生物的基因組文庫。

2、如果用某種生物發(fā)育的某時期的mRNA反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的多種互補DNA（也叫cDNA)片段，與載體連接后儲存在一個受體菌群中，那么，這個受體菌群體就叫做這種生物的cDNA文庫。

3、目的基因檢測與鑒定

（1）檢測目的基因是否已導(dǎo)入受體細(xì)胞。常采用DNA分子雜交技術(shù)，即將轉(zhuǎn)基因生物的基因組DNA提取出來，在含有目的基因的DNA片段上用放射性同位素等作標(biāo)記，以此作為探針，使探針與基因組DNA雜交，如果顯示出雜交帶，就表明目的基因已插入染色體DNA中。

（2）檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA。采用分子雜交技術(shù)，從轉(zhuǎn)基因生物中提取mRNA，用標(biāo)記的目的基因作探針，與mRNA雜交，如果顯示出雜交帶，則表明目的基因轉(zhuǎn)錄出了mRNA。

（3）檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)。采用抗原—抗體雜交，即從轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原一抗體雜交，若有雜交帶出現(xiàn)，表明目的基因已形成蛋白質(zhì)。

(1)①過程以某種生物發(fā)育的某個時期的mRNA為模板反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的多種互補DNA片段，與載體連接后儲存在一個受體菌群中，這個受體菌群叫做這種生物的cDNA文庫。由于啟動子和終止子不能轉(zhuǎn)錄，故cDNA文庫中獲取的目的基因無啟動子。PCR技術(shù)（過程②）可在體外大量擴(kuò)增目的基因，但前提是要一段有已知目的基因的核苷酸序列，以便合成引物。

(2)過程③將重組表達(dá)載體導(dǎo)入大腸桿菌時，首先用Ca2+處理細(xì)胞，使細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，這種細(xì)胞稱為感受態(tài)細(xì)胞。然后將重組表達(dá)載體DNA分子溶于緩沖液中與感受態(tài)細(xì)胞混合，在一定的溫度下促進(jìn)感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子，完成轉(zhuǎn)化過程。

(3)鑒定CarE基因是否已導(dǎo)入大腸桿菌，常采用DNA分子雜交技術(shù)。