Question

【題目】煙草葉片感染煙草花葉病毒（TMV）后既影響產(chǎn)量也影響品質(zhì)，沙棘果中含有的苦木素對(duì)TMV病毒具有抑制作用，現(xiàn)將沙棘中與苦木素合成有關(guān)的基因?qū)�入煙草，獲得抗TMV的煙草，培育過程如下圖。請(qǐng)回答有關(guān)問題：

（1）若①過程是由mRNA通過逆轉(zhuǎn)錄得到的目的基因，則目的基因中不含有_________________（答兩項(xiàng)），②過程構(gòu)建的Ti質(zhì)粒除了含有目的基因，還必須有標(biāo)記基因、_________。標(biāo)記基因是__________，其功能是___________________。

（2）③過程將重組Ti質(zhì)粒導(dǎo)入煙草體細(xì)胞的常用方法是____________。Ti質(zhì)粒上的T-DNA可使目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞，并將其_____________。

（3）過程⑤可采取_____________的方法，檢測(cè)植株是否合成與苦木素合成相關(guān)的蛋白質(zhì)；在個(gè)體水平的鑒定過程中，可通過______________的方法來確定植株是否具有抗性。

Answer 1

【答案】啟動(dòng)子、內(nèi)含子 啟動(dòng)子、終止子 卡那霉素基因 鑒定和篩選導(dǎo)入目的基因成功的受體細(xì)胞 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 插入植物的染色體上 抗原——抗體雜交 接種TMV病毒

【解析】

1、基因工程技術(shù)的基本步驟：

（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成；

（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等；

（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法；

（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）利用逆轉(zhuǎn)錄法得到的目的基因不含有啟動(dòng)子和內(nèi)含子，構(gòu)建重組Ti質(zhì)粒，除了含有目的基因外，還必須含有啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因，該培育過程中的標(biāo)記基因?yàn)榭�那霉素基因，用于鑒定和篩選導(dǎo)入目的基因成功的受體細(xì)胞。

（2）通常采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞，Ti質(zhì)粒上的T-DNA可使目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞，并將其插入植物的染色體上。

（3）可采用抗原抗體雜交法檢測(cè)與苦木素合成相關(guān)的基因是否表達(dá)，通過接種TMV病毒進(jìn)行個(gè)體水平上的檢測(cè)，檢測(cè)煙草有無對(duì)TMV的抗性。