Question

20．內(nèi)皮素（ET）是一種含21個(gè)氨基酸的多肽，它有強(qiáng)烈的血管收縮和促進(jìn)平滑肌細(xì)胞增殖等作用．研究發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮素功能異常與高血壓、糖尿病、癌癥等有著密切聯(lián)系．內(nèi)皮素主要通過與靶細(xì)胞膜上的內(nèi)皮素受體結(jié)合而發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)．ETA是內(nèi)皮素的主要受體，科研人員試圖通過構(gòu)建基因表達(dá)載體，實(shí)現(xiàn)ETA基因在細(xì)胞中高效表達(dá)，為后期ETA的體外研究以及拮抗劑的篩選、活性評(píng)價(jià)等奠定基礎(chǔ)．其過程如下（圖中SNAP基因是一種熒光蛋白基因，限制酶ApaⅠ的識(shí)別序列為C↓CCGGG，限制酶XhoⅠ的識(shí)別序列為C↓TCGAG）．請分析回答：

（1）完成過程①需要的酶是逆轉(zhuǎn)錄酶；與過程②相比，過程①特有的堿基配對方式是U-A．
（2）過程③中，限制酶XhoⅠ切割DNA，使磷酸二酯 鍵斷開，形成的黏性末端是-AGCT（或）．用兩種限制酶切割，獲得不同的黏性末端，其主要目的是使目的基因定向連接到載體上．
（3）過程⑥中，要用Ca²⁺（或CaCl₂） 預(yù)先處理大腸桿菌，使其處于容易吸收外界DNA的感受態(tài)．
（4）利用SNAP基因與ETA基因結(jié)合構(gòu)成融合基因，目的是檢測ET_A基因能否表達(dá)及表達(dá)量．
（5）人皮膚黑色素細(xì)胞上有內(nèi)皮素的特異受體，內(nèi)皮素與黑色素細(xì)胞膜上的受體結(jié)合后，會(huì)刺激黑色素細(xì)胞的分化、增殖并激活酪氨酸酶的活性，從而使黑色素急劇增加．美容時(shí)可以利用注射ETA達(dá)到美白祛斑效果，試解釋：ET_A能與內(nèi)皮素結(jié)合，減少了內(nèi)皮素與黑色素細(xì)胞膜上內(nèi)皮素受體的結(jié)合，抑制了內(nèi)皮素對黑色素細(xì)胞的增殖和黑色素的形成．

Answer 1

分析 分析圖形：1、2、3過程表示反轉(zhuǎn)錄法獲得目的基因的過程，4表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程，5表示利用限制酶切割質(zhì)粒的過程，6表示將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞的過程，7表示目的基因的檢測，以此分析答題．

解答 解：（1）圖中①是逆轉(zhuǎn)錄過程，需要逆轉(zhuǎn)錄酶的催化；①逆轉(zhuǎn)錄過程的堿基互補(bǔ)配對方式是：A-T、U-A、C-G、G-C，②過程的堿基配對方式為A-T、T-A、C-G、G-C，因此與過程②相比，①過程特有的堿基配對方式是U-A．
（2）③是利用限制酶XhoⅠ切割DNA獲得目的基因的過程，由于限制酶XhoⅠ的識(shí)別序列為C↓TCGAG，因此其切割形成的黏性末端是-AGCT（或）．圖中顯示利用了兩種限制酶切割目的基因和載體，從而獲得了不同的黏性末端，這樣可以防止目的基因與運(yùn)載體反向連接，即可以使目的基因定向連接到載體上．
（3）將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞常用感受態(tài)轉(zhuǎn)化法，即用Ca²⁺（或CaCl₂）預(yù)先處理大腸桿菌，使其處于容易吸收外界DNA的感受態(tài)．
（4）利用SNAP基因與ET_A基因結(jié)合構(gòu)成融合基因，可以檢測ET_A基因能否表達(dá)及表達(dá)量．
（5）ET_A能與內(nèi)皮素結(jié)合，減少了內(nèi)皮素與黑色素細(xì)胞膜上內(nèi)皮素受體的結(jié)合，抑制了內(nèi)皮素對黑色素細(xì)胞的增值和黑色素的形成，從而達(dá)到美容的目的．
故答案為：
（1）逆轉(zhuǎn)錄酶　U-A
（2）磷酸二酯-AGCT（或）　   使目的基因定向連接到載體上
（3）Ca²⁺（或CaCl₂）
（4）檢測ET_A基因能否表達(dá)及表達(dá)量
（5）ET_A能與內(nèi)皮素結(jié)合，減少了內(nèi)皮素與黑色素細(xì)胞膜上內(nèi)皮素受體的結(jié)合，抑制了內(nèi)皮素對黑色素細(xì)胞的增殖和黑色素的形成

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合轉(zhuǎn)基因香蕉形成的流程圖，考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理及操作步驟，能結(jié)合圖中信息準(zhǔn)確答題．