Question

3．大腸桿菌是人和動物腸道中普遍存在的一種兼性厭氧菌，在無氧條件下，大腸桿菌通過發(fā)酵能將葡萄糖轉變?yōu)槎喾N有機酸并產生CO₂等氣體．某研究機構使用“濾膜法”對受污染的河流水體進行了大腸桿菌活菌數目的測定．請回答：
（1）研究人員向葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)液中加入適量的溴麝香草酚藍水溶液，培養(yǎng)一段時間后可觀察到溶液顏色的變化為由藍變綠再變黃，并且在倒置的小管中出現氣泡．
（2）測定大腸桿菌活菌數目時，需制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基中為細菌提供氮源的物質是牛肉膏和蛋白胨．為了鑒別大腸桿菌菌落，可向培養(yǎng)基中加入伊紅美藍作為指示劑．
（3）為了便于統計污染嚴重的水體中活菌的數目，需將水樣進行適當稀釋，例如取水樣1 mL加入無菌水99mL，制備稀釋倍數為10²的稀釋液，并照此依次制備更高倍數的稀釋液．每個稀釋倍數的菌液取10mL進行過濾，然后將濾膜放置在培養(yǎng)基上．為了防止雜菌污染，稀釋、過濾和旋轉濾膜等操作都應該在酒精燈火焰附近進行．
（4）將放有濾膜的平板置于適宜條件下培養(yǎng)，每隔12h統計一次菌落數目，應選取菌落數目穩(wěn)定時的記錄作為結果．如果經過培養(yǎng)后稀釋倍數為10²的4個平板上菌落數分別為43、47、42、48，那么每升河水中約含大腸桿菌4.5×10⁷ 個．用這種方法測定的細菌數量比實際活菌數量要少，這是因為當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的是一個菌落．

Answer 1

分析 1、二氧化碳可使溴麝香草酚藍水溶液由藍變綠再變黃．
2、培養(yǎng)各種微生物的培養(yǎng)基的具體配方不同，但一般都含有碳源、氮源、水和無機鹽．
3、伊紅為酸性染料，美藍為堿性染料，大腸桿菌在含有伊紅美藍培養(yǎng)基上形成的菌落呈深紫色（黑色），并有金屬光澤，伊紅美藍是專一鑒別大腸桿菌的指示劑．
4、常用的純化微生物時的接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法．
5、稀釋涂布平板法能用于微生物的計數，其計算公式為：1毫升（克）樣品中的菌株數=（C÷V）×M，其中C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積（毫升），M代表稀釋倍數；用稀釋涂布平板法對微生物計數往往比活菌的實際數目低，因為當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的是一個菌落．

解答 解：（1）由題干“在無氧條件下，大腸桿菌通過發(fā)酵能將葡萄糖轉變?yōu)槎喾N有機酸并產生CO₂等氣體”，向葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)液中加入適量的溴麝香草酚藍培養(yǎng)一段時間的大腸桿菌，可產生CO₂氣體，CO₂可使溴麝香草酚藍水溶液由藍變綠再變黃，并且在倒置的小管中出現氣泡．
（2）用牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基培養(yǎng)細菌時，培養(yǎng)基中的牛肉膏和蛋白胨能為細菌提供氮源；伊紅美藍是專一鑒別大腸桿菌的指示劑，為了鑒別大腸桿菌菌落，可向培養(yǎng)基中加入伊紅美藍作為指示劑．
（3）用稀釋涂布平板法進行對微生物計數時，當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統計平板上的菌落數，就能推測出樣品大約含有多少活菌，若將水樣稀釋10²倍，可取水樣1mL加入到99mL的無菌水中進行稀釋；為了防止雜菌污染，整個操作過程應進行無菌操作，所以在稀釋、過濾和旋轉濾膜等操作時都應該在酒精燈火焰附近進行．
（4）統計培養(yǎng)的菌落數目時應選取菌落數目穩(wěn)定時的記錄作為結果，如果經過培養(yǎng)后稀釋倍數為10²的4個平板上菌落數分別為43、47、42、48，則平板上平均菌落數=（43+47+42+48）÷4=45個，每毫河水中約含大腸桿菌數=（C÷V）×M=（45÷0.1）×10²=4.5×10⁴個，每升河水中約含大腸桿菌數=4.5×10⁴×10³=4.5×10⁷個；用稀釋涂布平板法測定的細菌數量比實際活菌數量要少，這是因為當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的是一個菌落．
故答案為：
（1）由藍變綠再變黃 氣泡
（2）牛肉膏和蛋白胨 伊紅美藍
（3）99 酒精燈火焰
（4）穩(wěn)定 4.5×10⁷ 當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的是一個菌落

點評 本題考查微生物的培養(yǎng)、分離和計數的知識，考生識記所列知識點，并能運用所學知識做出合理的判斷或得出正確的結論是解題的關鍵．