Question

【題目】某科研小組從某溫泉口取得一批土樣，希望從中分離出耐高溫的可分解木質素的細菌。

（1）采集土樣后，為增加所需細菌的濃度，采用的培養(yǎng)方法是________________。

（2）為篩選分解木質素的細菌，培養(yǎng)基中加入的唯一碳源是__________，培養(yǎng)基中還必須包含水、無機鹽和______________等基本營養(yǎng)成分。從功能上講，這樣的培養(yǎng)基稱為__________培養(yǎng)基。為避免培養(yǎng)基污染，需將培養(yǎng)皿呈_____________狀態(tài)放置。

（3）培養(yǎng)過程中，常選擇菌落數在__________區(qū)間的平板統(tǒng)計計數。統(tǒng)計的菌落數往往比活菌的真實數目低，原因是____________________。

（4）研究小組利用基因工程技術成功表達并分離出木質素分解酶，為探究該酶的最適pH，應控制的無關變量有____________________________（寫出兩項即可）。

若需較長時間保持酶活性，酶制劑都應保存在____________________（填“低溫”、“最適溫度”或“高溫”）環(huán)境中。

Answer 1

【答案】震蕩培養(yǎng)（液體培養(yǎng)） 木質素 氮源 選擇 倒置 30~300 兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的是一個菌落 酶的用量、反應溫度、底物的含量等 低溫

【解析】

1、微生物常見的接種的方法：

①平板劃線法：將已經熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數逐漸減少，最后可能形成單個菌落。

②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經培養(yǎng)后可形成單個菌落，可用于微生物的計數。

2、培養(yǎng)基選擇分解木質素的微生物的原理：培養(yǎng)基的碳源為木質素，只有能分解木質素的微生物才能在這個培養(yǎng)基上生存，不能分解木質素的微生物由于缺乏碳源而不能生長發(fā)育繁殖從而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解木質素的微生物。

3、培養(yǎng)基按功能分：

種類	制備方法	特征	用途
選擇培養(yǎng)基	培養(yǎng)基中加入某種化學成分	根據某種微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某化學、物理因素的抗性而設計的培養(yǎng)基使混合菌樣中的劣勢菌變成優(yōu)勢菌，從而提高該菌的篩選率	如加入青霉素分離得到酵母菌和霉菌
鑒別培養(yǎng)基	加入某種試劑或化學藥品	依據微生物產生的某種代謝產物與培養(yǎng)基中特定試劑或化學藥品反應，產生明顯的特征變化而設計	如可用伊紅和美藍培養(yǎng)基可以鑒別大腸桿菌

（1）采集土樣后，為增加所需細菌的濃度，采用的培養(yǎng)方法是震蕩培養(yǎng)（液體培養(yǎng)）。

（2）為篩選分解木質素的細菌，培養(yǎng)基中加入的唯一碳源是木質素；培養(yǎng)基中還必須包含水、無機鹽和氮源等基本營養(yǎng)成分；從功能上講，這樣的培養(yǎng)基稱為選擇培養(yǎng)基；為避免培養(yǎng)基污染，需將培養(yǎng)皿呈倒置狀態(tài)放置。

（3）通常選用一定稀釋范圍的樣品液進行培養(yǎng)，以保證獲得菌落數在30~300之間、適于計數的平板；統(tǒng)計的菌落數往往比活菌的真實數目低，原因是兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的是一個菌落。

（4）影響酶的因素有反應溫度、酶的用量、pH、底物含量等，為探究該酶的最適pH，應控制的無關變量有反應溫度、酶的用量、底物含量等；低溫抑制酶的活性，若需較長時間保持酶活性，酶制劑都應保存在低溫環(huán)境中。